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研究背景：结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,我国的结肠癌发病率呈明显上升趋势。近年来人们开始关注结肠癌的微环境免疫,发现结肠癌患者的预后与原发肿瘤微环境的免疫相关。肿瘤微环境中的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes, TILs)是微环境免疫的重要组成部分,其中T淋巴细胞在肿瘤免疫中发挥重要作用。以往研究对基因改变和肿瘤免疫之间的关系关注很少,但二者并非孤立存在,它们之间的复杂关系还有待于进一步探讨。研究目的：1.探讨结肠癌微环境中肿瘤浸润T细胞(包括CD4+T细胞,CD8+T细胞,CD45RO+T细胞,Treg,Th1细胞)分布表达情况,及其与临床和病理特征的关系。2.初探结肠癌微环境中调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)形成及作用机制,包括：(1)肿瘤浸润树突状细胞、巨噬细胞对Treg形成分布的影响。(2)结肠癌微环境中Treg是否通过颗粒酶B发挥细胞毒作用。3.探讨K-ras基因突变对结肠癌微环境中肿瘤浸润T细胞的影响材料与方法：选取27例手术切除的结肠癌标本,配对肿瘤组织(避开坏死和出血区域)和癌旁组织。采用免疫组织化学染色方法,检测CD、CD8、CD45RO、Treg (FOXP3)、Th1(T-bet)表达及分布情况；分析肿瘤浸润T细胞各群的分布和表达,以及与患者临床和病理特点的相关性。采用免疫组织化学染色方法,检测肿瘤浸润树突状细胞、巨噬细胞和颗粒酶B的分布表达,分析Treg (FOXP3)表达与肿瘤浸润树突状细胞(S-100)、巨噬细胞(CD68)、颗粒酶B的相关性。显微切割结肠癌组织,提取DNA, PCR扩增K-ras基因,测序鉴定K-ras基因突变。分析K-ras基因突变与肿瘤浸润T细胞分布表达之间的相关性。实验结果：(1)结肠癌微环境中CD4+T细胞、CD45RO+T细胞、Th1(T-bet)在肿瘤组织中表达数量低于癌旁组织(均满足P<0.001),Treg (FOXP3)表达在肿瘤组织中高于癌旁组织(P<0.001)。结肠癌组织的FOXP3/T-bet值高于癌旁组织(P<0.001),而CD8/FOXP3值低于癌旁组织(P=0.021)。(2)结肠癌组织CD4+T细胞、CD45RO+T细胞、FOXP3和T-bet阳性表达与患者临床病理特点均无显著相关性(P>0.05)。癌旁组织CD8+T细胞数量在非血管浸润组高于血管浸润组(P<0.001)。癌旁组织T-bet表达在临床分期Ⅰ和Ⅱ组高于Ⅲ和Ⅳ组(P=0.002),在Duke分期A、B和C+D各组间存在差异,表达随分期增高而减少(P=0.011)。(3)结肠癌中S-100蛋白表达在肿瘤组织显著高于癌旁组织(P<0.001)。肿瘤组织S-100蛋白的表达与FOXP3表达相关(r=0.839,P<0.001)。颗粒酶B表达在癌旁显著高于肿瘤组织(P<0.001),肿瘤组织颗粒酶B表达在非血管浸润组高于血管浸润组(P<0.001)。颗粒酶B表达与FOXP3无相关性(P>0.05)(4)19例结肠癌组织中K-ras基因突变率为42.11%,K-ras基因突变与非突变组相比,结肠癌浸润T淋巴细胞表达无统计学差异(P>0.05)。小结：(1) CD4+T细胞、CD45RO+T细胞和Th1细胞(T-bet)在结肠癌组织中表达低于癌旁组织,而Treg(FOXP3)却与之相反。(2) FOXP3/T-bet在肿瘤组织中高于癌旁组织,而CD8/FOXP3在肿瘤组织表达低于癌旁组织。(3)结肠癌微环境中S-100蛋白表达与FOXP3呈正相关,而颗粒酶B与FOXP3表达无相关性。结论：(1)肿瘤浸润T细胞(包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD45RO+T细胞、Treg和Thl细胞)构成了结肠癌肿瘤微环境,其中肿瘤组织中以负向免疫调节占优势,而癌旁组织以正向免疫为主导。(2)结肠癌微环境中树突状细胞可能参与了Treg形成的调控机制。而肿瘤巨噬细胞(CD68)与结肠癌微环境Treg细胞的形成无关。颗粒酶B并没有参与Treg细胞调控免疫逃逸的机制。(3) K-ras基因突变对结肠癌组织浸润T细胞表达无影响。