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肿瘤生物治疗技术是近年来因生物技术发展而兴起的一种肿瘤治疗手段，是指采用生物制剂，直接或通过调节宿主的肿瘤防御机制间接抑制或消除肿瘤生长的一种治疗方法，被认为是除手术、化疗、放疗之外的第四种肿瘤治疗模式。能特异性杀伤肿瘤细胞的溶瘤病毒是肿瘤生物治疗中重要的方法之一，也是当前肿瘤治疗基础研究和临床应用的热点与发展方向。近年来国际上应用重组痘苗病毒进行肿瘤生物治疗取得了重大进展，开发出了新一代溶瘤病毒，临床试验显示对肝癌等恶性肿瘤具有较好的疗效，且具有良好的稳定性和安全性。 痘苗病毒(vaccinia virus，VACV)是痘病毒家族成员之一，世界性天花消除过程中发挥了重要作用。生物医学工作者对VACV的生物学特性、致病性、免疫性等诸多方面已有了较为透彻的了解。近年来，国外一些学者致力于将重组痘苗病毒(rVACV)应用于肿瘤的生物治疗，其中一些研究已取得较大突破，特别是JX-594已进入Ⅲ期临床试验，为最终攻克肿瘤带来了新的希望，应用前景十分广阔，但国内的同类研究目前尚未见报道。 本课题拟以VACV的细胞毒性为切入点，利用基因重组技术，敲除野生型VACV的VGF和/或TK基因，获得具有肿瘤靶向性的溶瘤病毒VACV-VGF-、VACV-TK-和vvDD，并对这些重组病毒的体内外复制特性、致病性、抗肿瘤效应等进行了研究。 研究结果表明，体外在所检测的几株细胞中包括CV-1、BSC-1、Vero、Hela细胞中病毒都可以较好地复制，而在B16.F10和CT26.WT细胞中病毒的复制受到了限制;MTS法细胞毒性实验中，针对不同的细胞各病毒的杀伤力有所不同，且对B16.F10细胞基本不表现杀伤作用;在小鼠黑色素瘤模型中，相比于野生型VACV，rVACV主要集中分布于肿瘤组织中，且在病毒注射Day9时除VACV-VGF-外，VACV-TK-和vvDD在脑、脾等非肿瘤组织中几乎检测不到，而肿瘤组织中高达108 pfu/100mg;相比于野生型病毒，重组病毒注射后小鼠生存时间不同程度有所延长，但相对VACV-VGF-或VACV-TK-，vvDD的毒性降低更加明显;针对黑色素瘤，相比于对照组，重组病毒对肿瘤生长起到了明显抑制作用，且对比于TK或VGF基因单缺失病毒，vvDD的抗肿瘤效果更佳。综上，TK或/和VGF缺失后，病毒的致病性降低，肿瘤靶向性及抗肿瘤效应均提高，且vvDD的作用更加显著。