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乳酸菌是蔬菜表面常见的附生微生物,长期以来被认为是安全的。近年来,越来越多的抗生素耐药性乳酸菌被发现具有一定可转移性,这给乳酸菌的安全性敲响了警钟,依照严格标准种植的有机蔬菜被认为是安全的,然而,抗生素耐药菌对有机肥料、土壤和水体污染的加剧,使有机蔬菜在种植过程中不可避免的被这些耐药菌附着,给有机蔬菜特别是鲜食有机蔬菜的安全性带来隐患。本研究以市售有机白萝卜为研究对象,分析其表皮附生乳酸菌对常见抗生素的耐药性及其耐药基因。分离菌株通过生理生化特征、RAPD聚类分析、(GTG)5-PCR聚类分析和16S rRNA分析表明:有机白萝卜表皮附生约有4.67×103CFU/cm2的乳酸菌,分离的187株乳酸菌分别属于Pediococcus pentosaceus(114/187)、Weissella cibaria(9/187)、Leuconostoc mesenteroides(18/187)、Leuconostoc pseudomesenteroides(7/187)、Leuconostoc citreum(20/187)和Leuconostoc holzapfelii(19/187)。利用微量肉汤稀释法测定乳酸菌的最小抑菌浓度(MIC),根据欧洲抗微生物药物敏感委员会(http://www.eucast.org)关于微生物对不同抗生素敏感阈值数据库分析乳酸菌的抗生素敏感性,结果表明,在187株乳酸菌分离株中耐药性乳酸菌占的比例为18.72%(35/187),其中单一耐药菌株占的比例为3.2%(6/187),二重耐药菌株占的比例为6.95%(13/187),三重耐药菌株占的比例为8.56%(16/187)。对AMP的耐药比例为3.74%(7/187),对CHL的耐药比例为9.09%(17/187),对ERY的耐药比例为0,对STR的耐药比例为13.9%(26/187),对TET的耐药比例为16.04%(30/187)。利用PCR扩展技术检测耐药乳酸菌中抗性基因。检测结果表明从35株耐药菌株中,属于ABC外排泵家族的外排泵基因efr A和efr B基因同时被检出的检出率为80%;属于RND蛋白家族的外排泵基因acrA和acrB同时被检出的检出率为22.86%,tolC基因的检出率为94.29%;属于SMR外排蛋白家族的sugE基因的检出率为77.14%;属于MFS外排蛋白家族的norB基因的检出率为14.29%;位于染色体上且属于MFS外排泵家族的norC基因的检出率为82.86%,mdfA基因的检出率为65.71%,同属于MFS外排蛋白家族的还有sdrM基因,检出率为17.14%;属于MATE家族的norE基因检出率为28.57%。在30株四环素耐药菌株中,编码四环素外排蛋白基因tetA的检出率为50%;tetB基因的检出率为93.33%;tet C基因的检出率为66.67%;tet D基因的检出率为80%;tet E基因的检出率为36.67%;tetG基因的检出率为86.67%;tet J基因的检出率为50%;tetK基因的检出率为86.67%。编码四环素核糖体保护蛋白基因tetO在16株四环素耐药菌株中被检出,检出率为53.33%;tet Q基因在26株四环素耐药菌株中被检出,检出率为86.67%;tetS基因的检出率为93.33%;tetM基因的检出率为36.67%;tetW基因的检出率为100%。在30株四环素耐药菌株中,基因tetX的检出率为26.67%。在26株链霉素耐药菌株中,抗性基因strA的检出率为50%;strB基因的检出率为84.62%;aad A基因的检出率为76.92%;aph(3’)-IIIa基因的检出率为80.77%;aac(6’)-aph(2’’)基因的检出率为50%。对2株AMP耐药菌株的bla和blaZ抗性基因进行检测,菌株P.pentosaceus LCB184同时含有bla和blaZ两种抗性基因,菌株P.pentosaceus LCB176只含有bla基因。