酶抑制法检测蔬菜中的有机磷农药残留的方法研究

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自有机氯农药被禁用以来,有机磷农药成为我国使用量最大的农药,广泛使用中的有机磷农药品种属于高毒性农药,大量使用会造成许多潜在的危害,如污染环境、药害及人畜中毒等,尤其是由蔬菜中有机磷农药残留所引起的中毒现象十分严重。要预防和处理有机磷农药引起的环境、食品污染等问题,最有效的策略就是及时、准确检测有机磷农药。近年来有许多关于有机磷农药残留的快速检测方法的报道,这些快速检测方法大都是基于酶抑制的原理。 本文利用酶抑制原理,采用植物酯酶和乙酰胆碱酯酶法检测有机磷农药残留。主要包括以下五个方面的内容: 1.综述了酶抑制法检测有机磷农药残留检测方法的进展。根据酶的来源可以分为:植物酯酶法和乙酰胆碱酯酶法。在植物酯酶法中根据显色原理的不同主要有固蓝B盐法和2,6-二氯靛酚钠盐法;乙酰胆碱酯酶法的显色剂主要是DTNB显色。乙酰胆碱酯酶比较昂贵,需要从动物中提取,过程复杂,只能在大城市的一些超市里使用,也不可能在全国范围内推广使用。植物酯酶便宜易得,提取方便,在有机磷的快速测定中有更广泛的应用价值。 2.采用固蓝B盐法对来源于玉米粉和面粉的植物酯酶进行比较,筛选出酶活性强得多的面粉酶作为检测用酶,并对影响酶活性的条件进行了优化研究,确定了植物酯酶的最佳活性反应条件是pH7.5,温度45℃。同时还对该法检测农药的各影响因子进行了分析研究,确定了一个比较适宜的农药检测反应体系条件,并发现农药在0~2.5μg/mL范围内,三种农药对植物酯酶的抑制作用与农药浓度基本上呈现的是线性关系。当以抑制率15%作为检测阈值时,乐果、敌敌畏、辛硫磷的检出限分别为0.3、0.2、0.1mg/kg,用于实际样品有机磷农药检测时,能定性的检测出农药是否超标。 3.对2,6-二氯靛酚钠盐法检测农药含量的各影响因子进行了分析研究,发现结果与固蓝B盐法相类似,确定了适合该方法的各个反应条件,并发现农药在0~2.5μg/mL范围内,三种农药对植物酯酶的抑制作用与农药浓度基本上呈现的也是线性关系。该方法与国标相比,结果的灵敏度不够高,主要原因可能是提取的酶未经纯化所致,但当以吸光度0.5~0.6作为检测阈值时,该方法的乐果、敌敌畏、辛硫磷的检出限都在国标同种方法的检出限范围内。 4.对乙酰胆碱酯酶活性的影响条件进行了优化研究,确定了乙酰胆碱酯酶的最佳活性反应条件是pH8.0,温度45℃。同时还对乙酰胆碱酯酶法检测农药的各影响因子进行了分析研究,确定了一个适宜的农药检测反应体系,并发现农药在1.0×10-4~1.0μg/mL范围内,三种农药对植物酯酶的抑制作用与农药浓度呈线性关
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