【摘 要】
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背景:全基因组关联分析发现跨膜蛋白132D(transmembrane p rotein 132D,TMEM132D)是惊恐障碍(Panic disorder,PD)的敏感基因。儿童期虐待作为童年创伤经历的主要类型已成为备受国内外关注的公共卫生问题,被证实为PD发病的危险因素,但其对PD的作用机制尚未厘清。目的:本研究旨在探索PD患者症状严重度与不同类型儿童期虐待的相关性,探索TMEM132D基因
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背景:全基因组关联分析发现跨膜蛋白132D(transmembrane p rotein 132D,TMEM132D)是惊恐障碍(Panic disorder,PD)的敏感基因。儿童期虐待作为童年创伤经历的主要类型已成为备受国内外关注的公共卫生问题,被证实为PD发病的危险因素,但其对PD的作用机制尚未厘清。目的:本研究旨在探索PD患者症状严重度与不同类型儿童期虐待的相关性,探索TMEM132D基因启动子区域甲基化水平与PD患者症状间的关系。进一步探讨TMEM132D基因启动子区域甲基化在PD患者症状与儿童期虐待经历间发挥的作用,研究其在参与PD发病过程中可能的原因,以期探索与PD患者儿童期虐待相关的表观遗传学关联。方法:招募30名PD患者及30名正常对照者,并采用儿童期虐待问卷(Childhood Trauma Questionnaire,CTQ)、惊恐障碍严重度量表(Panic Disorder Severity Scale,PDSS)及汉密尔顿焦虑量表(H amilton Anxiety Scale,HAMA)来评估童年期虐待经历及症状。采集受试者肘静脉血,提取DNA,质控后设计引物,DNA经重亚硫酸盐处理后以多重PCR扩增TMEM132D基因启动子片段,检测TMEM132 D基因启动子区域49个CpG位点的甲基化程度。使用SPSS23.0进行统计分析,比较两组的量表和基因数据,分析TMEM132D基因启动子区域甲基化程度与儿童期虐待及PD临床症状的相关性。采用中介效应模型探讨差异性CpG位点的甲基化程度在儿童期虐待及临床症状之间的关系。结果:(1)PD组和HC组的CTQ得分在总分、情感虐待项目、情感忽视项目和躯体忽视项目上的差异具有显著性(p<0.05),而在躯体虐待、性虐待上差异不显著(p>0.05);相关分析得出,PDSS得分与情感虐待的相关性显著(r=0.555,p=0.006),偏相关分析显示,PDS S的得分与情感虐待的得分呈正相关(r=0.514,p=0.029);回归分析显示情感虐待进入方程(R2值为0.035,p=0.000)。(2)TMEM132D 基因启动子区域CpG4、CpG6、CpG7、CpG8 和CpG10五个位点的甲基化水平在PD组均显著高于HC组(CpG4:t=2.674,p=0.011;CpG6:t=2.618,p=0.008;CpG7:t=2.140,p=0.004;CpG8:t=2.178,p=0.033;CpG10:t=3.392,p=0.001);TMEM 132D基因启动子区域的CpG4和CpG8两个位点的甲基化程度均与PD SS 得分存在正相关(CpG4:r=0.412,p=0.041;CpG8:r=0.509,p=0.009)。(3)相关分析显示,TMEM132D基因启动子区域的CpG4、CpG6位点和情感虐待呈正相关(CpG4:r=0.575,p=0.004;CpG6:r=0.427,p=0.043);CpG8位点的甲基化程度与躯体忽视和情感虐待均呈正相关;TEME132D基因启动子区CpG位点甲基化作为自变量,以PD SS得分为因变量,线性回归分析结果显示,位点CpG4、CpG8进入方程,调整后R2=0.036,方程可解释3.6%的变异量。(4)TEME132D基因CpG4、CpG8位点甲基化水平的共同中介效应在情感虐待对PD的影响过程中的中介效应比为52.24%,有统计学意义。单个中介变量的效应比分别为33.41%、14.87%,显示CpG4、CpG8位点甲基化水平在情感虐待对PD影响过程中的独立中介作用也显著。Bootstrap中介检验程序的结果显示,情感虐待对PD的总效应为0.6759,有统计学意义(t=18.513,p<0.001),而在 CpG4、CpG8 的中介作用下,儿童期情感虐待对PD的直接效应为0.3228,有统计学意义(t=8.964,p<0.001),且a×b×c’>0,因此CpG4、CpG8甲基化水平在儿童期情感虐待对PD临床症状的影响过程中起部分中介作用。结论:(1)儿童期的虐待经历与PD的存在密切相关,并且对PD具有预测作用,其中情感虐待对PD的影响最为显著;(2)TMEM132D基因启动子区CpG岛位点高甲基化水平与PD存在显著相关,可能增加PD的风险;(3)TMEM132D基因启动子区CpG岛位点甲基化水平在儿童期情感虐待经历对PD症状产生影响的过程中有部分中介作用。当个体遭受更多情感虐待时,TMEM132D基因启动子区上CpG4位点和CpG8位点可能会有更高的甲基化水平,从而对PD产生作用。
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