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目的：
建立胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠作为研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的动物模型。通过检测白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)、细胞核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL)在CIA大鼠关节滑膜的表达,研究两者在CIA大鼠关节滑膜病变发生发展中的作用。观察来氟米特(leflunomide,LEF)及99锝-亚甲基二膦酸盐(technetium-99tertiary diphosphine,99Tc-TDP)对IL-17、RANKL在CIA大鼠关节滑膜表达的影响,探讨LEF及99Tc-TDP的干预作用。
方法：
80只雌性SD大鼠随机选取10只为空白对照组,其余70只为造模组。造模组自鼠尾至鼠背皮下多点注射鸡Ⅱ型胶原乳剂(0.5mg/只),一周后以相同方法相同剂量加强免疫,空白对照组注射等量生理盐水。四周后造模组大鼠关节炎指数(arthritis index,AI)评分,选取AI≥6分者40只随机分为模型灌胃组、模型静脉组、LEF组、99Tc-TDP组,每组10只。LEF组和99Tc-TDP组分别予LEF(5mg/kg/d,2ml)灌胃、99Tc-TDP(0.05μg/kg/d99Tc,1ml)尾静脉注射。空白对照组、模型灌胃组予2ml生理盐水灌胃,模型静脉组予1ml生理盐水尾静脉注射,持续三周。每周测量大鼠体重、足爪容积、AI值。药物干预结束后,各组大鼠心脏取血,留取关节液,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定大鼠血清及关节液IL-17、RANKL浓度。留取膝关节滑膜组织,苏木素-伊红(HE)染色,观察关节滑膜病理,计算滑膜病理积分,免疫组织化学法(SP法)检测关节滑膜IL-17、RANKL蛋白的表达,用Image-Pro Plus6.0图像分析软件半定量分析。所有数据用SPSS13.0软件进行统计,各组均数间比较采用单因素方差分析。
结果：
①造模组70只大鼠分别于造模后1周、2周各死亡2只,造模成功大鼠48只,出现关节肿痛、关节强直,成功率约68.6％。
②模型灌胃组、模型静脉组、LEF组和99Tc-TDP组大鼠足爪容积大于空白对照组(P<0.05),模型两组无显著性差异(P>0.05)。给药1周后LEF组足爪容积小于模型组和99Tc-TDP组(P<0.01)。给药2周后LEF组足爪容积小于99Tc-TDP组(P<0.01),99Tc-TDP组足爪容积小于模型组(P<0.01)。给药2周后LEF组和99Tc-TDP组AI值低于模型组(P<0.01)。给药3周后LEF组AI值低于99Tc-TDP组(P<0.01)。
③模型灌胃组和模型静脉组大鼠关节滑膜病理积分高,两组无显著性差异(P>0.05),LEF组和99Tc-TDP组较模型组低(P<0.05),LEF组较99Tc-TDP组低(P<0.05)。
④模型灌胃组、模型静脉组、LEF组和99Tc-TDP组大鼠血清、关节液IL-17浓度及关节滑膜IL-17蛋白表达较空白对照组增加(P<0.01),模型两组无显著性差异(P>0.05),LEF组和99Tc-TDP组较模型组降低(P<0.05),LEF组较99Tc-TDP组降低(P<0.05)。
⑤各组大鼠血清RANKL浓度无显著性差异(P>0.05)。模型灌胃组、模型静脉组、LEF组和99Tc-TDP组大鼠关节液RANKL浓度及关节滑膜RANKL蛋白表达较空白对照组增加(P<0.01),模型两组无显著性差异(P>0.05),LEF组和99Tc-TDP组较模型组降低(P<0.05),99Tc-TDP组较LEF组降低(P<0.05)。
结论：
①应用鸡Ⅱ型胶原乳剂可成功诱导CIA大鼠动物模型。
②IL-17和RANKL在CIA大鼠关节滑膜表达增强,可能参与了关节滑膜病变的发生发展。
③1EF可抑制CIA大鼠关节滑膜IL-17和RANKL的表达,缓解CIA大鼠关节炎症状,减轻滑膜炎症。
④99Tc-TDP可抑制CIA大鼠关节滑膜IL-17和RANKL的表达,延缓关节滑膜病变进展。
⑤LEF对CIA大鼠关节滑膜表达IL-17的抑制作用强于99Tc-TDP,99Tc-TDP对RANKL的抑制作用强于LEF。