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目的:探讨肠道菌群影响雌鼠受孕发育的机制,为利用肠道菌群调整和改善不孕症打下基础。方法:1.实验分组:选择清洁级4周龄Swiss雌性小鼠(ICR)264只。随机分为2组:肠道菌群紊乱组与正常对照组。2.实验批次:分四批次(春夏秋冬),每批次66只雌性Swiss小鼠,其中肠道菌群紊乱组与正常对照组各33只。3.实验周期:每批次实验小鼠周期为46天,肠道菌群紊乱组小鼠自第1天起进行肠道菌群紊乱至28天止,之后进行受孕,雌鼠与雄鼠进行合笼,合笼比例为雌鼠:雄鼠=3:1。连续观察雌性小鼠孕栓3天,出现孕栓的雌性小鼠继续饲养16天处死,没有出现孕栓小鼠当即处死。4.菌群失衡模型的建立:菌群紊乱组雌性小鼠用400mg/ml头孢曲松钠灌胃,灌胃剂量为0.2ml/次/只,一日2次,间隔6-8小时,连续四周,同时设置正常对照组,用生理盐水灌服,剂量方法同上。5.孕栓检查:合笼交配后于第二天早上检测孕栓。观察雌性小鼠阴道白色凝固残留物。有残留物的即为孕栓及受孕。6.样本收集:收集雌性小鼠卵巢、血清、胚胎小鼠肠道、肠内容物和粪便进行指标检测。7.应用ELISA方法对各组小鼠血清雌酮、雌二醇、睾酮、雄烯二酮水平进行检测。8.应用PCR-DGGE方法对各组小鼠肠道菌群进行分析,对差异明显条带进行切胶回收、纯化、测序,测序结果经GenBank比对后确定细菌种类;9.收集雌鼠卵巢,进行HE染色切片,观察卵巢形态变化。结果:1.菌群紊乱组受孕鼠数为79只,受孕率为81.4%;正常对照组受孕鼠数为69只,受孕率为71.1%,两组差别显著(P<0.05)。与正常对照组相比,菌群紊乱组受孕率高于正常组10.3%。2.季节的变化和菌群紊乱对受孕率均有影响,与正常对照组相比,冬季菌群紊乱组变化最为明显,受孕率为87.0%;春季和夏季菌群紊乱组变化次之,受孕率分别为81.80%和76.0%;秋季菌群紊乱组变化不明显,受孕率为62.9%。3.菌群紊乱组的死胎数为32只,死胎率为4.44%,与正常对照组相比,两组间有显著差别(P<0.05),菌群紊乱组的死胎率高于正常对照组。4.在雌鼠的胎鼠中发现胎鼠肠道具有肠道菌群的16srna的序列。5.与对照组相比,菌群紊乱组孕鼠雌酮、雌二醇含量降低(p<0.05);雄烯二酮含量升高(p<0.05),睾酮含量没有显著变化(p>0.05)6.与正常对照组雌鼠卵巢相比,菌群紊乱组雌鼠卵巢颗粒细胞层薄,卵泡膜层薄,卵泡增多,卵泡明显增大。结论1.肠道菌群缺失使得受孕率升高,死产率升高。2.肠道菌群缺失使得性激素受到影响。3.肠道菌群缺失使得卵巢形态发生变化。4.发现胎鼠肠道具有肠道菌群的16sRNA的序列。5.肠道菌群紊乱可以用总核酸浓度替代形态学和PCR-DGGE方法。