论文部分内容阅读
目的：建立L-精氨酸诱导的重症急性胰腺炎大鼠模型,观察腹膜透析液短期间歇性闭合式腹腔灌洗治疗早期重症急性胰腺炎的效果,采用双抗体夹心ELISA法测定血TLR4和sCD14浓度变化,及免疫组织化学染色法分析NF-kB表达水平,对其免疫机制做初步研究。方法：腹腔注射70g/L的L-精氨酸(3×1.2g/kg)制成重症急性胰腺炎大鼠模型。雄性Sprague-Dawley大鼠(简称SD大鼠)48只,随机分为3组,SAP模型组；对照组；灌洗组。模型组和对照组分别腹腔注射70g/L的L-精氨酸(3×1.2g/kg,1次/h)和等量0.9%生理盐水(分3次注射,1次／h)后12、24、36h麻醉处死。灌洗组大鼠在造模后1h置于20-30。倾斜铁架固定,备皮,于腹部上、下方置管(上腹置管位于胰腺区,下腹置管位于髂窝),留置腹腔灌洗装置,行腹膜透析液腹腔灌洗(1次／6h,100ml／次,灌洗速度60滴/min左右；12h组灌洗2次,24h组灌洗4次,36h组灌洗6次),完成灌洗后即刻处死大鼠。从大鼠腹主动脉取血测定血清淀粉酶、脂肪酶含量,双抗体夹心ELISA法测定血浆TLR4、sCD14浓度,取胰腺组织作病理切片进行HE染色及病理评分,免疫组化法观察胰腺组织NF-kB表达水平。结果：(1)病理观察结果：大剂量L-精氨酸诱导重症急性胰腺炎大鼠模型成功。对照组大鼠胰腺组织无明显改变,光镜下无间质水肿,未见炎性细胞浸润；模型组大鼠可见胃肠胀气,肠系膜及腹膜脂肪组织液化坏死,部分出现了血性腹水,镜下间质内大量炎性细胞浸润,胰腺小叶结构紊乱,胰腺组织坏死,且随时点改变程度加重；灌洗组镜下间质炎性细胞较模型组减少,小叶结构有所改善,坏死程度相应减轻。灌洗组胰腺组织病理学评分较模型组和对照组均有统计学意义(P<0.05)；(2)血淀粉酶、脂肪酶检测结果：灌洗组血清淀粉酶、脂肪酶含量较模型组降低(P<0.05),较对照组无明显统计学意义(P>0.05)；(3)血TLR4、sCD14检测结果：灌洗组血TLR4、sCD14浓度在各时点较模型组降低(P<0.05),较对照组无明显统计学意义(p>0.05)；(4)胰腺组织NF-kB表达水平检测结果：灌洗组胰腺组织NF-kB表达水平较模型组下降,对照组NF-kB表达较少或基本无表达。结论：(1)成功建立L-精氨酸诱导的重症急性胰腺炎大鼠模型,胰腺组织间质中大量存在的炎性细胞浸润改变和TLR4、sCD14及NF-kB水平的增高,提示三种因子与胰腺炎时炎症密切相关；(2)腹膜透析液短期间歇性闭合式腹腔灌洗对早期重症急性胰腺炎大鼠有较好的抑制免疫作用。