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目的了解华北理工大学附属医院不同感染途径碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌（Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE）的分子流行特征、临床耐药情况以及临床感染特征,为有效控制传播以及临床治疗提供依据。方法收集华北理工大学附属医院2017年6月2018年12月不同途径感染CRE菌株,并追溯患者临床资料;菌株鉴定和药敏试验采用VITEK2-Compact全自动细菌鉴定药敏系统,药敏方法同时联合纸片扩散法（K-B法）、E-Test方法;采用PCR方法检测碳青霉烯酶基因（KPC、NDM、IMP、VIM、OXA-48）、超广谱β-内酰胺酶基因（SHV、TEM、CTX、OXA-1）、Amp C酶基因（DHA、MOX、FOX）、膜孔蛋白基因（Omp K35、Omp K36）、喹诺酮类耐药基因（qnr A、qnr B、qnr S、aac（6’）-Ib-cr、qep A）、氨基糖苷类耐药基因（aac A4、rmt B、arm A、aph A6）以及磺胺类耐药基因（dhrf）,掌握CRE基因分型特点;通过质粒接合试验分析141株产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌（Enterobacteriaceae producing carbapenemase,CPE）的基因转移性;菌株的同源性分析采用脉冲场凝胶电泳（Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）联合多位点序列分型（Multilocus sequence typing,MLST）,根据PFGE分型结果挑选出不同型别的代表菌株进行MLST,了解不同感染途径CRE分子分型特点。结果1临床资料:2017年6月2018年12月分离的146株CRE菌株主要来自于重症医学科（46.58%）,位居前三位的菌种是肺炎克雷伯菌（117株）、大肠埃希菌（19株）、阴沟肠杆菌（6株）,标本主要来源于呼吸道标本（53.42%）、血液（32.19%）,尿液（8.9%）,肺炎克雷伯菌主要集中在呼吸道感染以及血流感染菌株中,检出率均大于80%,大肠埃希菌主要集中在泌尿系感染菌株中（38.46%）。2基因分型情况:碳青霉烯酶基因阳性共检出141株（96.57%）,以blaKPC-2检出最多（82.88%）,其次为blaNDM-5（15.75%）。不同菌种之间碳青霉烯酶基因阳性率均大于80%,碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（Carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）主要携带blaKPC-2（91.23%）,碳青霉烯类耐药的大肠埃希菌（Carbapenem-resistant Escherichia coli,CREC）主要携带blaNDM-5（89.47%）。不同感染途径碳青霉烯酶基因结果显示,blaKPC-2是呼吸道感染菌株（78.95%）和血流感染菌株（86.67%）的主要基因型别。ESBLs基因阳性率（97.26%）高于Amp C酶基因阳性率（75.34%）,且合并膜孔蛋白基因缺失的情况也更为严重（54.79%,34.25%）。在产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌（Enterobacteriaceae producing carbapenemase,CPE）与非产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌（Non-Enterobacteriaceae producing carbapenemase,NCPE）中,NCPE的ESBLs基因或Amp C酶基因合并膜孔蛋白基因缺失情况都比CPE更为严峻。泌尿系感染菌株ESBLs基因合并膜孔蛋白基因缺失率最高（84.62%）。3耐药基因情况:所有菌株均检出喹诺酮类耐药基因,blaqnrB以及blaqnrS主要集中在肺炎克雷伯菌当中检出（97.29%,80%）,blaqnrA主要在阴沟肠杆菌检出（57.14%）。大肠埃希菌的氨基糖苷类耐药基因检出情况较为严峻（78.95%）,在不同感染系统当中,泌尿系感染菌株更易携带基糖苷类耐药基因（84.62%）,磺胺类耐药基因阳性率较低（6.85%）4质粒接合试验:10株（7.09%）CRE转移成功,供体菌主要分布在肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、黏质沙雷氏菌、布氏枸橼酸杆菌中,接合成功率分别为6.14%、5.26%、100%、100%,其中blaKPC接合成功率为4.96%（6/121）,blaNDM接合成功率为13.33%（4/30）。5同源性分析:117株CRKP分为46个PFGE分型,其中有4个型别包含的菌株数大于等于5株,分别为PT08（40株）、PT10（5株）、PT34（5株）、PT37（7株）;19株CREC共分离出8个PFGE型别,优势型别是ECPT03（11株）。CRKP的主要型别菌株大多来源于呼吸道标本以及血液,CREC优势型别菌株来源广泛,可在呼吸道标本、血液、尿液以及脑脊液中检出,但两者都主要集中在ICU以及NICU检出。MLST分型结果显示,91株代表性CRKP有12个ST型别,主要流行型别为携带blaKPC-2的ST11（49株）,发现一株新ST型（STNEW,等位基因谱为gap A1、inf B5、mdh1、pgi1、pho E1、rpo B1、ton B1）;8株代表性CREC有8个ST型别,主要流行型别为携带blaNDM-5的ST167（6株）,发现一株新型ST型（STECNEW,等位基因谱为adk9、fum C65、gyr B193、icd18、mdh11、pur A8、rec A6）。6药敏结果:CRE菌株对氨苄西林、氨曲南、头孢唑林、头孢他啶、亚胺培南均表现为耐药,对美罗培南、左氧氟沙星、复方新诺明、庆大霉素、阿米卡星的耐药率分别为98.63%、94.52%、46.57%、45.89%、43.15%,替加环素和多粘菌素均表现敏感。泌尿系感染的菌株对各类常见抗生素耐药率均大于50%,大肠埃希菌对各类常见抗生素耐药率均大于70%。结论1华北理工大学附属医院CRE菌株的耐药情况十分严峻,在不同感染途径中,以泌尿系感染菌株耐药情况较为严重。菌株主要分离自呼吸道标本、血液以及尿液,位居前三位的菌种是肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌以及阴沟肠杆菌。2呼吸道感染菌株和血流感染菌株主要携带的碳青霉烯酶基因是blaKPC-2;blaNDM-5主要集中于泌尿系感染菌株;产ESBLs或Amp C酶合并膜孔蛋白缺失是NCPE碳青霉烯类耐药的主要机制,且泌尿系感染菌株中产ESBLs基因合并膜孔蛋白基因缺失情况检出最多。3华北理工大学附属医院的CRKP、CREC存在优势型别,CRKP流行的克隆群为携带blaKPC-2的ST11型,CREC流行的克隆群为携带blaNDM-5的ST167型,blaNDM易通过质粒转移进行耐药性传播。图15幅;表16个;参208篇。