矩形臂尾轮虫与螺形龟甲轮虫线粒体基因组序列的测定与分析

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本研究测定了矩形臂尾轮虫(Brachionus leydigi)线粒体基因组全序列及螺形龟甲轮虫(Keratella cochlearis)mtDNA-Ⅱ序列,主要方法包括轮虫单克隆培养、DNA提取、引物设计、PCR扩增、产物鉴定与纯化、DNA序列测定及分析。实验结果显示矩形臂尾轮虫线粒体基因组由两个DNA环组成,分别命名为mtDNA-Ⅰ(10892 bp)、mtDNA-Ⅱ(12288 bp)。矩形臂尾轮虫线粒体基因组包含12个蛋白质编码基因、22个tRNA编码基因以及2个rRNA编码基因,两个DNA环上各有一段4500 bp左右的非编码区,同源性高达99%。12个蛋白质编码基因中,除ND4、ND5基因的起始密码子为ATA,其余的蛋白质编码基因均以ATG为起始密码子。ATP6、ND4、ND4L蛋白质编码基因的终止密码子为TAG,其余基因的都是以TAA为终止密码子。矩形臂尾轮虫线粒体基因组AT碱基含量非常丰富,mtDNA-Ⅰ环上A+T=70.57%,mtDNA-Ⅱ环上A+T=70.79%。螺形龟甲轮虫mtDNA-II总长11133 bp,包含8个编码蛋白质的基因,3个tRNA编码基因以及一段长约3.6 kb的非编码区。螺形龟甲轮虫有6个基因的起始密码子是ATG(COXI、ND6、ND4L、ND5、COX3和ND3),另外的2个是以ATA为起始密码子(ND4和COX2)。螺形龟甲轮虫mtDNA-II环上的A+T的含量为67%。将本研究测定的矩形臂尾轮虫线粒体基因组结合Genbank中9种轮形动物门物种和本实验室研究的3种臂尾轮虫的线粒体基因组,以Acropora tenuis为外群,基于10种蛋白质编码基因(ND1-3、ND5、ND6、COX1-3、ATP6、CYTB)序列,利用 Mega6.0软件进行序列的比对和分析,运用 NJ法(Neighbor-Joining)重建了分子系统树,对轮形动物门13种动物的系统发生关系进行了探讨。
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