论文部分内容阅读
1.目的黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.,Lrm)为传统民族药,可用作治疗心脏疾病及妇科疾病。现因其独特的抗氧化作用被大众熟知,多被用作保健品。黑果枸杞中含有大量花色苷类成分,使其成熟果实呈深紫色。但是花色苷类物质易被受热降解,传统的烘干法无法最大程度保存黑果枸杞中的有效成分,本研究拟运用冻干赋形制剂技术制备出黑果枸杞冻干赋形制剂,从外观性状指标、化学指标和生物活性指标三个方面进行制剂工艺的筛选和优化,以达最大限度保护花色苷的目的。同时也为冻干赋形制剂技术在其他含有热不稳定成分的中药应用中提供理论支持和技术支撑。2.方法本研究从黑果枸杞的体外生物活性出发,探讨了黑果枸杞对于H202干预下的H9c2心肌细胞的氧化应激保护作用,选择出简单易重复的生物活性评价指标。同时建立总花色苷和多糖的检测方法。以制剂的制备溶液粘度、外观性状、H9c2心肌细胞凋亡率以及总花色苷含量四个评价指标,运用单因素和实验设计中的筛选设计进行制剂处方的筛选。筛选出最佳处方后进行冻干曲线的优化,以物料共晶点为基础,成型制剂外观性状、微观结构为评价指标,节能环保为原则进行冻干工艺的改良。确定最佳冻干工艺路线之后对制剂的包装进行筛选,在加速条件下考察制剂的外观性状、含水量以及总花色苷的含量,最终选出最适宜的包装。按筛选出的工艺制备3个批次制剂,对该工艺进行初步评价。主要以外观性状、微观结构、崩解时间、水分含量、重量差异进行评价。同时还对黑果枸杞冻干赋形制剂、鲜黑果枸杞、干黑果枸杞进行生物活性指标和有效成分的化学指标进行对比。3.结果(1)运用H202进行氧化应激损伤模型造模的最佳浓度为400 μmol/L,造模时间为6 h。MTT实验中表明黑果枸杞可以增强H9c2细胞活力值,最佳给药浓度为1.00mg/mL,给药时间为8h。最终确定给药模型为1.00mg/mLLrm溶液预处理H9c2心肌细胞2h,加入 400 μmol/LH2O2 干预 6h 后,进行 TUNEL、Real time-PCR、Western-Blotting 的指标检测。TUNEL、Real time-PCR、Western-Blotting的结果均表明Lrm具有抗氧化的作用,可以对氧化应激损伤的细胞有保护作用,最终选择TUNEL法检测H9c2凋亡率作为制剂工艺筛选的生物活性指标。(2)本研究建立了 pH示差法检测总花色苷、苯酚-硫酸法检测多糖的方法。并通过外观性状指标、制备溶液粘度、细胞凋亡率、花色苷含量筛选出的最佳处方为甘露醇3%、普鲁兰3%,黑果枸杞果粉100 mg/片。低能耗且制剂形态良好的冻干曲线包括-20℃、-12.5℃、-5℃、10℃、35℃五个温度区段,总时长为985 min。最佳包装为双铝泡罩包装。(3)按最终工艺制备的3批次制剂外观均一光滑、微观结构整齐有序、崩解时间小于15 s、水分含量为4.30%、重量差异符合要求。TUNEL法结果表明冻干赋形制剂的抗氧化活性与鲜果无显著性差异(P>0.05),其总花色苷含量相当于1.1颗鲜果枸杞。4.结论黑果枸杞冻干赋形制剂在外观性状、生物活性、化学成分含量方面均符合制剂要求,且其总花色苷含量高于传统烘干黑果枸杞,说明冻干赋形制剂技术在保存热不稳定成分中有重要意义。