生物被膜型白念珠菌代谢物分析及代谢变化的初步研究

来源 :第二军医大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:hejiankimi
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代谢组学发展方兴未艾,目前代谢组学的研究已经渗透到微生物学、植物学、疾病诊断等各大邻域。本研究就是借助代谢组学的技术手段,以白念珠菌为研究对象,研究其能量代谢物的变化及初步研究其产生变化的原因。白念珠菌是一种双相型真菌,在人体中,无症状时常表现为酵母细胞型;侵犯组织和出现症状时常表现菌丝型。白念珠菌感染通常是深部感染,致死率比较高。在临床治疗过程中发现白念珠菌易形成被膜,产生耐药性,给治疗带来很大阻力。本论文运用代谢指纹分析方法,以GC-MS为分析手段研究白念珠菌的代谢物,区别浮游型和被膜型白念珠菌,并通过化学计量学方法对图谱进行分析,推出两者可能的差异代谢物。法尼醇(Farnesol)是抑制白念珠菌由酵母型向菌丝型转变的一种感应分子,它由白念珠菌产生并排到细胞外,研究表明在培养基中外加感应分子法尼醇可以抑制白念珠菌生物被膜的形成。海藻糖(Trehalose)是细胞中的一种应激代谢物,在细胞处于应激时可大量合成,恢复平常状态下又迅速降解。海藻糖含量的变化从某种程度上反映了机体对外界环境的响应。由于糖的组分复杂,结构相似,加之糖没有显色基团,难以不经衍生就进行光谱、色谱分析,因此,糖的分析难度较大。本研究正是建立了一种简便快速准确的测定海藻糖的方法,用来测定法尼醇干扰下被膜型白念珠菌中海藻糖的含量变化,结果发现法尼醇的干预确实会引起海藻糖的含量波动。为了解释海藻糖含量波动的原因,又从白念珠菌细胞中海藻糖的代谢循环着手研究。虽然其代谢循环过程比较简单,但却是由复杂的调控机制所调控。本文研究调控代谢过程的酶的基因——hxk、tps1、tps2、ath1、nth、zwf,研究它们在法尼醇作用下基因的转录水平的变化。研究表明,这六种基因转录水平差异明显,部分解释了海藻糖含量变化的原因。本课题建立了海藻糖的含量测定方法,研究了白念珠菌被膜形成过程中细胞内法尼醇含量的变化以及外加法尼醇对细胞内海藻糖生成的影响,为白念珠菌耐药性研究提供了参考。
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