【摘 要】
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目的:通过对体外不同培养时间的虹膜色素上皮(iris pigmen tepithelium,IPE )细胞形态学及生理功能的研究,了解IPE细胞在体外培养保存中细胞活性及增殖状态的变化过程.同时,
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目的:通过对体外不同培养时间的虹膜色素上皮(iris pigmen tepithelium,IPE )细胞形态学及生理功能的研究,了解IPE细胞在体外培养保存中细胞活性及增殖状态的变化过程.同时,通过体外培养IPE细胞药物干预的实验研究,以期得到对IPE细胞具有促增殖能力的药物,为临床使用IPE替代RPE进行视网膜移植提供参考依据.方法:1、IPE细胞体外培养实验:采用含20﹪和10﹪胎牛血清的F12培养液,进行细胞体外培养,细胞计数法测定IPE细胞的生长曲线,并进行免疫组化鉴定.2、不同培养时间IPE细胞超微结构的观察:取培养5天、11天、15天IPE细胞,按常规方法制备电镜标本,通过扫描电镜和透射电镜观察不同培养时间IPE细胞超微结构的变化过程.3、药物对IPE细胞线粒体膜电位的影响观察:按常规法进行细胞线粒体膜电位荧光标记,用共聚焦显微镜(Confocal)测定枸杞、黄芪、当归、枸杞多糖、黄芪多糖、阿魏酸、牛磺酸、甘氨酸、精氨酸等对IPE细胞线粒体膜电位的影响.4、药物对IPE细胞增殖活性的影响观察:采用MTT和Confocal技术,测定各种药物对IPE细胞增殖的影响.结论:在适宜培养条件下,IPE细胞可在体外进行有效的活性保存,细胞增殖,进而满足治疗需要.不同培养时间内,IPE细胞活性和增殖状态呈现动态变化趋势.该研究发现,以培养后5天至11天为较好的体外IPE培养和保存时限,为临床开展此技术提供了理论依据,使得开展IPE体外扩增成为了可能.通过药物干预实验发现了包括中药、氨基酸和生长因子在内的多种成分具有有效的IPE药物保护作用,为提高IPE移植疗效,进行临床新药研发提供了有价值的参考依据.该研究结果大多未见相关报道,因而具有较高的学术创新性.
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