论文部分内容阅读
E2F1是重要的转录因子，在细胞周期调控、细胞增殖和凋亡中都具有重要作用。在本研究中，通过启动子活性检测和Northern blot分析，我们确定了E2F1可以激活TSP1的转录。通过对TSP1启动子多个突变体的分析，我们将E2F1在TSP1启动子上的作用位点定位在转录起始位点上游的-144到-137区域，而且这一区域是E2F1转录激活TSP1所必须的。过表达的E2F1可以转录激活TSP1，与之一致的是，内源性E2F1敲降可以明显抑制TSP1启动子的活性。此外，CHIP检测揭示了E2F1可以直接结合在覆盖-144到-137区域的TSP1启动子区。而且E2F1对TSP1的转录激活受到pRB的抑制。总之，所有结果表明TSP1是E2F1新的下游基因，E2F1有可能通过调控TSP1的表达来影响血管的再生能力。
VHL的失活会导致肾癌、嗜铬细胞瘤以及其他器官的肿瘤疾病。在这里我们确定了VHL是E2目的一个下游基因。通过启动子荧光素酶活性检测和实时定量PCR分析，我们确定了E2F1可以转录激活VHL。同时我们将E2F1在VHL启动子上的作用位点定位在转录起始位点上游的-42到-34区域，这一区域是E2F1转录激活VHL所必须的。
作为E2F1的靶基因，VHL与E2F1结合并抑制其转录激活活性。通过细胞内免疫共沉淀实验，我们发现E2F1可以与VHL在细胞内相互结合。而且，GST-pull down实验也表明，pVHL和E2F1在体外也可以直接结合。此外，我们检测了VHL对E2F1几个下游基因和报告基因的影响，结果表明pVHL明显抑制E2F1对下游基因的转录激活作用。pVHL可以与E2目的DNA结合结构域紧密结合，而E2目的这一结构域也正是P300(或P/CAF)的结合位点，这说明VHL可能与P300(P/CAF)竞争性的结合E2F1，进而抑制E2目的转录激活作用。VHL与E2目的相互作用可能与VHL疾病的发生有关。