【摘 要】
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诺如病毒是一种致病性较强的食源性及水源性病毒,该病毒常通过污染水源引起人群的急性胃肠炎的暴发。对于诺如病毒的鉴定主要是通过实时荧光定量RT-PCR的方法,因为诺如病毒无
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诺如病毒是一种致病性较强的食源性及水源性病毒,该病毒常通过污染水源引起人群的急性胃肠炎的暴发。对于诺如病毒的鉴定主要是通过实时荧光定量RT-PCR的方法,因为诺如病毒无法通过细胞和组织培养法在实验室进行培养,当水中诺如病毒量较低的时就无法检测到。为了克服水体中诺如病毒的富集难题,本论文拟建立以纳米金属氧化物(纳米氧化钛、纳米氧化锆)修饰纤维素滤纸富集水中病毒的方法,通过优化有关具体构筑及检测的参数,最终建立一套能够快速、高效、简便、便宜富集检测的方法,解决水中诺如病毒检测技术的问题。1、建立了实时荧光定量RT-PCR检测诺如病毒的方法,对方法的灵敏度、特异性、稳定性进行了验证,利用临床标本对方法的实际检测效果进行了实验。将GII型诺如病毒标准质粒绘制细针绝对定量标准曲线,回归方程为Y=-3.3661x+46.441,相关系数R~2值为0.9993,方法的最低检测浓度为9.1×10~2copies/μL,三个浓度批内和批间重复试验CT值的变异系数均小于2%,该方法具有较高灵敏度,准确性和重复性好,可以应用于水中诺如病毒富集的检测。2、通过比较纳米二氧化钛和二氧化锆修饰滤纸的富集效果发现,纳米二氧化钛修饰滤纸的富集效果更好,能够用于水中诺如病毒的检测方法中。3、对纳米二氧化钛修饰滤纸富集水中诺如病毒方法的条件进行优化。当水中诺如病毒浓度为9.1×10~3copies/μL时,用10L水样通过3层纳米二氧化钛修饰滤纸进行富集,流速控制在0.5L/min,并用含(3%牛肉膏和0.1M甘氨酸、pH为9.5)的洗脱液进行洗脱时效果最好,能将水中病毒浓度提高到3.9×10~6copies/μL,实现了429倍浓缩,方法回收率为4.3%。4、通过对阴离子膜法和絮凝沉淀法对比发现,纳米二氧化钛修饰滤纸富集方法具有浓缩体积大的特点,在一定的条件下,可以富集到更多数量诺如病毒进行实时荧光定量RT-PCR检测。对54份实际样本进行检测,检出GⅡ型诺如病毒4份,说明方法对具有一定实用价值。
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