宫内感染暴露与早产儿NRDS、BPD发生的关系及格列本脲对宫内感染肺损伤大鼠的保护作用研究

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目的:通过胎盘病理检查筛选宫内感染(IAI)病例,探讨胎龄<32周患儿的新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)、支气管肺发育不良(BPD)发生与孕妇IAI的关系及IAI胎盘病理分期与NRDS、BPD严重程度的关系。方法:选择青岛市妇女儿童医院2018年7月至2020年6月在NICU治疗的胎龄小于32周的早产儿。排除于外院出生,资料不全,有严重畸形等情况的患儿后共纳入病例332例。根据胎盘检查的结果(是否存在感染)将患儿分为IAI组和对照组,其中IAI组患儿231例,对照组患儿101例。根据既往研究,收集与NRDS及BPD的发生可能相关的产前及产后资料并进行分析,了解两组病例一般资料及治疗等情况的差异。对IAI组与对照组数据进行比较,探究IAI对胎龄<32周早产儿NRDS及BPD发生的影响,以及胎盘病理分期与NRDS及BPD严重程度的关系。结果:1.两组患儿母亲的年龄、初产率、单胎率,合并糖尿病、胎膜早破、胎盘早剥率,产前糖皮质激素使用率及患儿宫内窘迫发生率无显著差异(P>0.05)。IAI组母亲产前抗生素使用率为60.2%(139/231),显著高于对照组的48.5%(49/101)(P<0.05)。2.两组患儿的胎龄、性别、出生体重,出生窒息率、1 min Apgar评分、5 min Apgar评分、Pa O2、Pa CO2、及乳酸无显著差异(P>0.05)。3.IAI组母亲产前WBC、产前CRP>0.8mg/L率显著高于对照组,IAI组患儿WBC及CRP>0.8mg/L率显著高于对照组(P<0.05)。两组患儿PCT无显著差异(P>0.05)。4.IAI组患儿BPD的发生率为40.3%(93/231),显著高于对照组患儿的26.7%(27/101)(P<0.05)。IAI组患儿NRDS的发生率为29.0%(67/231),显著低于对照组患儿的45.5%(46/101)(P<0.05)。5.在67例NRDS患儿中,相关性分析显示IAI胎盘病理分期与NRDS的分级无相关性(rs=-0.045,P=0.720)。在93例BPD早产儿中,相关性分析显示IAI胎盘病理分期与BPD的分度无相关性(rs=0.052,P=0.621)。6.两组患儿气管插管率、有创通气时间、最高吸氧浓度、无创通气率、无创通气时间及吸氧时间无显著差异(P>0.05)。IAI组患儿肺表面活性物质使用率为25.5%(59/231),显著低于对照组的41.6%(42/101)(P<0.05)。结论:1.IAI与胎龄<32周患儿NRDS、BPD的发生密切相关,IAI母亲所生早产儿BPD发生率相对较高,NRDS发生率相对较低。2.IAI的胎盘病理分期与胎龄<32周早产儿NRDS分级、BPD分度可能无关。3.母亲产前WBC、CRP升高,患儿生后24h内WBC、CRP升高可能与IAI的发生相关。目的:1.使用LPS建立IAI模型,观察LPS对孕鼠胎盘炎症的影响。2.观察IAI大鼠所生新生鼠存活率、体重、肺重、肺组织病理变化,检测肺组织NLRP3及MMP-9的表达情况。3.观察格列本脲对IAI大鼠胎盘炎症的影响及新生鼠上述指标的变化,探究格列本脲对IAI及新生鼠肺损伤的影响。方法:1.实验分组:选取受孕大鼠24只,随机分至对照组、LPS组(LPS干预)及治疗组(LPS+格列本脲干预),每组孕鼠均为8只。2.IAI模型制作和格列本脲干预:LPS组及治疗组孕鼠18日孕龄时0.5mg/kg LPS腹腔注射一次,对照组孕鼠于相同时间点注射等剂量溶剂。治疗组孕鼠在LPS注射后12小时进行一次1mg/kg格列本脲混悬液灌胃,并于孕19、20日龄重复一次,对照组及LPS组孕鼠于相同时间胃内灌注等剂量溶剂。3.标本收集:每组于孕21日龄随机选取1只孕鼠,麻醉后取胎盘组织放入甲醛固定,剩余孕鼠自然分娩,新生鼠分别于第1天、7天及14天处死,取左下肺用于HE染色检查或免疫组织化学染色检查。4.指标观测:每只孕鼠于灌胃操作前及灌胃操作1h后行尾静脉穿刺检测血糖水平,孕鼠分娩后随机选取每只孕鼠所生的1只新生鼠进行血糖检测。观察孕鼠胎盘病理改变,DAB染色检测胎盘NLRP3水平。观察孕鼠死亡及流产情况,观察新生鼠数量及存活情况,于生后第1天、7天及14天新生鼠处死前称量体重,处死后称量肺重,计算肺重/体重数值。于生后第1天、7天及14天观察肺泡隔厚度,第7天及14天进行辐射状肺泡计数(RAC),第1天及7天DAB染色检测肺组织NLRP3及MMP-9水平。结果:1.全部孕鼠未出现死亡或流产,对照组获得新生鼠76只均存活,存活率100%;LPS组获得新生鼠73只,存活70只,存活率95.9%;治疗组获得新生鼠74只均存活,存活率100%。2.LPS组胎盘可见大量中性粒细胞,组织充血、水肿明显,胎盘结构排列紊乱,NLRP3化学染色阳性细胞数量较多;对照组胎盘结构层次清晰,未见明显炎症反应,NLRP3化学染色仅有个别阳性细胞;治疗组胎盘可见部分炎症细胞,充血、水肿程度较轻,NLRP3化学染色可见少量阳性细胞。3.各组孕鼠灌胃前后及新生鼠血糖检测均未发现低血糖的情况。4.各组新生鼠相同时间点的体重差异均无统计学意义(P>0.05)。5.LPS组新生鼠生后第1天肺重显著低于对照组及治疗组(P<0.0167);生后第1天对照组与治疗组新生鼠肺重的差异不显著(P>0.0167);生后第7天、14天三组肺重的差异不显著(P>0.05)。6.LPS组新生鼠生后第1天肺重/体重显著低于对照组及治疗组(P<0.0167);生后第1天对照组与治疗组新生鼠肺重/体重的差异不显著(P<0.0167);生后第7天、14天三组肺重/体重的差异不显著(P>0.05)。7.随着新生鼠出生日龄的增加,对照组肺泡隔变薄,LPS组轻度增厚,治疗组轻度变薄。8.三组新生鼠生后第7天RAC的差异不显著(P>0.05);生后第14天对照组与治疗组RAC的差异不显著(P>0.0167);生后第14天LPS组新生鼠RAC显著低于对照组及治疗组(P<0.0167)。9.生后第1天LPS组新生鼠肺组织NLRP3水平显著高于对照组,生后第7天LPS组新生鼠NLRP3水平显著高于对照组和治疗组(P<0.0167)。生后第1天LPS组及治疗组新生鼠肺组织MMP-9水平显著高于对照组,生后第7天LPS组新生鼠肺组织MMP-9水平显著高于对照组和治疗组(P<0.0167)。其余生后第1天或第7天两组新生鼠肺组织NLRP3或MMP-9的比较均无显著差异(P>0.0167)。结论:1.IAI可影响胎鼠肺组织在宫内的发育,致新生鼠肺损伤,影响肺脏发育,导致大鼠出生后14天内肺泡隔逐渐增厚,肺泡生成减少。2.IAI孕鼠孕晚期胃内灌注格列本脲可减轻胎盘炎症反应,降低新生鼠肺组织NLRP3及MMP-9水平,减轻肺损伤,改善肺组织的发育,证实NLRP3炎性小体及MMP-9在IAI引起的新生鼠肺损伤中发挥重要作用。
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