核糖体L12、S20蛋白在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制中的作用研究

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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又被称为蓝耳病,在1986年首次被报道后迅速蔓延至几乎所有养猪国家,给全球养猪业造成巨大的经济损失。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种包膜病毒,包膜蛋白在病毒感染、组装及释放过程中起着重要的作用。其中,PRRSV GP2b是一种非糖基化的膜蛋白,参与病毒的侵入和复制,并在两种类型的PRRS病毒粒子中高度保守且相对大量存在,因此,GP2b有可能成为防控PRRSV的基因靶点之一,鉴于GP2b蛋白在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制周期中具有重要作用,本实验室前期通过酵母双杂交筛选到与GP2b互作的核糖体蛋白L12、S20,它们在PRRSV复制中的作用还不明确。本研究通过免疫共沉淀和激光共聚焦试验检验核糖体蛋白与PRRSV GP2b蛋白在细胞中是否存在相互作用,通过荧光定量PCR和Western blotting等方法,检测了PRRSV感染细胞后对核糖体蛋白表达的影响,以及过表达和敲减RPL12、RPS20对PRRSV在Marc-145细胞中复制的影响,并构建RPL12、RPS20截断体质粒,验证其功能区域。结果显示核糖体蛋白L12与PRRSV GP2b蛋白之间存在相互作用,并在细胞质中共定位。PRRSV感染细胞后能够上调细胞中RPL12的表达。随着PRRSV的复制,RPL12的转录水平和蛋白水平均明显增强。进一步研究发现过表达RPL12能够促进PRRSV的复制,而敲减RPL12能够抑制PRRSV的复制,构建RPL12截断体质粒并发现其促病毒区域位于66-166aa之间。核糖体蛋白S20与GP2b蛋白之间存在相互作用,并在细胞质中共定位。PRRSV感染能够上调RPS20的表达,随着RRRSV的复制,RPS20的转录水平和蛋白水平均明显增强。过表达RPS20促进PRRSV在Marc-145细胞中的复制,敲减RPS20能够抑制病毒的复制,构建RPS20截断体质粒,并发现其促病毒区域在40-80aa之间。本研究首次发现了PRRSV感染细胞后会上调RPL12、RPS20的表达,两者与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,并在细胞质中共定位。过表达RPL12能够促进PRRSV的复制,其促病毒区域位于66-166aa之间,过表达RPS20能够促进PRRSV的复制,其促病毒区域位于40-80aa之间,这些结果为进一步研究PRRSV的感染与复制以及与宿主的相互作用提供了新的切入点,为抗病毒药物的研供了有益的探索。
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