聚合物型色谱柱在紫杉醇提纯及核苷分离方面的研究

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聚苯乙烯-二乙烯基苯型高聚物色谱分离填料由于其具有比表面积大,分离效率高,耐酸碱等优点,因此在天然产物分离方面运用十分广泛。  紫杉醇是一种广谱抗癌药物,对多种癌症均有良好的疗效,全球需求量与日俱增。近年来,有关紫杉醇的分离纯化及其制备方面的报道越来越多。在紫杉醇的制备过程中,提取分离后期对紫杉醇及其烷类化合物的分离效果直接关系到紫杉醇产品的纯度,其中特别是三尖杉宁碱,其结构与紫杉醇非常相似,对二者的分离是紫杉醇纯化工艺中的重要内容。  本论文以聚苯乙烯-二乙烯基苯型高聚物色谱填料对紫杉醇与三尖杉宁碱的分离体系及分离条件进行了优化,确定了最佳色谱条件为:乙腈(C)-水(A)为流动相,流速为1.0mL/min,室温,检测波长为229nm,进行分段梯度洗脱(0-5min,60%C;5-6min,60-40%C;6-36min,40-60%C;36-60min,60%C)。然后将其分离规律放大到制备柱上,实现分离纯化的线性放大。实验表明,经一步柱色谱法分离即可制备得到纯度大于98%的紫杉醇纯品,且确定了聚合物型制备色谱柱上的最佳色谱条件为:流速:3.0mL/min,检测波长:229nm,室温,进样体积:100μL,(0-5min,60%C;5-15min,60%C-50%C;15-25min,50%C;25-45min,50%C-60%C;45-60min,60%C)实现紫杉醇与三尖杉宁碱的有效分离。进而由该方法实现了线性放大到20倍的制备纯化中,这给紫杉醇的分离纯化向工业化方向发展提供了有价值的理论和实验依据。  核苷在生物代谢中均有重要的作用,是当前许多领域如生命科学、临床医学、药物机理和食品等方面,均有着广泛的研究和探讨。高效液相色谱法(HPLC)是利用分离物质在色谱柱内的固定相与流动相之间的分配系数差异而实现有效分离的。目前文献中报道较多的是采用硅胶基质为填料分离核苷,但该基质填料存在易对样品造成不可逆吸附、耐酸碱能力差等不足,而本实验采用的聚合物型色谱填料耐水性、酸碱性好,且无不可逆吸附,以该高聚物型色谱填料为分离介质对5种核苷化合物的分离条件进行了优化,确定了最佳色谱条件为:流动相:甲醇(B)和0.01mol/LKH2PO4(A);流速:1.0mL/min;检测波长:251nm;检测温度:30℃;梯度洗脱:0-5min,0-5%B;5-25min,5-40%B。在最佳梯度洗脱条件下,5种核苷类化合物均达到了基线分离,且理论塔板数均大于3万/m,较文献中柱效高出约1.2倍。本实验分离方法与文献方法比较可知,流动相洗脱条件简单,检测温度更接近于室温,且本方法操作简便、灵敏度高,可用于今后核苷类化合物的分离与分析。
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