【摘 要】
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将单一的替代性TH基因或保护性GDNF基因用于PD的基因治疗已经进行了深入的探讨;在该实验中,我们试图进一步探索在PD基因治疗中联合应用TH和GDNF基因的效果.我们构建了重组有T
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将单一的替代性TH基因或保护性GDNF基因用于PD的基因治疗已经进行了深入的探讨;在该实验中,我们试图进一步探索在PD基因治疗中联合应用TH和GDNF基因的效果.我们构建了重组有TH和GDNF基因的逆转录病毒载体,并转入包装细胞,进而感染靶细胞,进行了体外及体内实验.实验过程为首先扩增目的基因TH和GDNF,构建分别重组有TH和GDNF的逆转录病毒质粒pLHCX/TH和pLNCX2/GDNF,将重组质粒以脂质体介导的方法分别转入包装细胞PA317和PT67细胞;经筛选,RT-PCR,免疫组化,原位杂交等鉴定得到产毒细胞PA317和TP67/GDNF.培养COS-7细胞,以两种产毒细胞的上清分别感染COS-7细胞,先筛选后,再经体外免疫组化,原位杂交鉴定后,将经遗传改造的细胞移植到大鼠PD动物模型的纹状体内进行实验.实验结果证明TH和GDNF在靶细胞重可以表达,且筛选后阳性细胞增加显著;在体内实验中,可以观察到这两种外源基因可同时在大鼠脑内表达蛋白.因而,将TH和GDNF联合应用于PD基因治疗是可行的,值得进一步探索.
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