生产可降解塑料的基因工程菌的构建

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聚β-羟基烷酸酯(Polyhydroxyalkanoate,PHA)是一种由微生物合成的聚酯,由于具有生物可降解性、生物相容性、光学性、压电性、气体相隔性等许多优良性能,而有可能在众多领域,如生物降解性包装材料、组织工程材料和缓释材料等方面得到广泛应用,因此正日益引起了科研领域及工业界的广泛兴趣。 本文用聚合酶链式反应扩增并克隆了真养产碱杆菌(Alcaligenes eutrophus)中合成聚β-羟基丁酸酯(poly-β-hydroxybutyrate,PHB)的三个关键酶--β-酮硫裂解酶基因phbA、依赖NADPH的乙酰乙酰CoA还原酶基因(phbB)和PHB合成酶基因(phbC),成功构建了含有phbA的表达载体并转入巨大芽孢杆菌中进行表达,旨在提高PHB产量降低成本。论文取得了如下研究成果: (1)从GeneBank中查询了关于真养产碱杆菌中phbA、phbB、phbC基因的序列,设计了PCR引物,以真养产碱杆菌中提取的总DNA为模板,采用PCR扩增法克隆出phbA、phbB和phbC三段基因。 (2)选用大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭质粒,成功构建了含有phbA的表达载体,并转入巨大芽孢杆菌中进行表达。 (3)用菌落直接PCR法鉴定了重组质粒。 (4)摇瓶发酵研究表明,重组巨大芽孢杆菌可以利用葡萄糖、果糖、可溶性淀粉和丁酸等多种碳源合成PHB,且细胞干重与PHB百分率都有了大幅度提高。重组巨大芽孢杆菌可以利用可溶性淀粉等廉价底物,进一步降低PHB的生产成本,也可以把丁酸作为PHB合成的前体,提高PHB的产量。
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