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氨肽酶N (Aminopeptidase N,APN/CD13)是一种锌离子依赖性的外肽酶,在多种肿瘤细胞表面高表达,可降解细胞外基质,促进新生血管生成,从而促进肿瘤侵袭转移,以APN为靶点的靶向性抗肿瘤药物研究倍受关注。基于APN的结构特点,药学工作者设计了一系列化合物。其中环酰亚胺类肽化合物CIP-13F就是一类以APN为靶点的小分子类肽化合物。目的：研究APN抑制剂CIP-13F抗肿瘤侵袭转移及血管生成的作用机制,为药物开发和恶性肿瘤临床治疗奠定实验基础。实验方法：以L-亮氨酰对硝基苯胺底物法分析CIP-13F对APN表达阳性的肿瘤细胞的APN酶活性的抑制作用。以MTT法评价CIP-13F对APN表达阳性的肿瘤细胞的生长抑制作用。以transwell chamber法观察CIP-13F对APN高表达的ES-2细胞游走能力的抑制作用。以人脐静脉内皮细胞HUVEC体外成管型实验检测CIP-13F对内皮细胞成管型的抑制作用。C57BL/6小鼠于左前肢腋部皮下接种Lewis肺癌细胞,建立Lewis肺癌自发性肺转移模型。将荷Lewis肺癌小鼠随机分为阴性对照组、CIP-13F高剂量组(100mg/kg)、CIP-13F低剂量组(50mg/kg)、Bestatin组(100mg/kg)。每组8只,接种24h后,尾静脉注射给药,持续三周。观察移植瘤生长情况。接种后第22天处死瘤鼠,计算抑瘤率,计算肺转移抑制率。分别以免疫组织化学法、免疫流式细胞术和Western blotting法检测Lewis肺癌组织中APN的表达水平。分别以Annexin V/PI法、DNA片段法和TUNEL法检测Lewis肺癌细胞的凋亡变化。以免疫组织化学法检测CD34表达水平评价肿瘤微血管密度MVD。以Western blotting法检测Lewis肺癌组织中血管生成相关因子VEGF、bFGF和TGF-α的表达。结果：CIP-13F能抑制APN表达阳性的肿瘤细胞的APN的活性。CIP-13F能抑制体外生长的APN表达阳性的肿瘤细胞的增殖。CIP-13F能抑制ES-2细胞穿过人工基底膜的能力。CIP-13F对荷Lewis肺癌小鼠的原发肿瘤灶具有较强的抑制作用。分别以CIP-13F50mg/kg和100mg/kg剂量尾静脉注射给药3周,肿瘤生长抑制率分别为29.4%和45.8%。CIP-13F100mg/kg能够有效降低荷Lewis肺癌小鼠的肺表面转移瘤灶的数量。以免疫组织化学法、免疫流式细胞术和Western blotting法检测Lewis肺癌组织中APN的表达水平,发现CIP-13F能明显抑制Lewis肺癌组织中APN的表达水平。分别以Annexin V/PI法、DNA片段法和TUNEL法检测Lewis肺癌细胞的凋亡变化,发现CIP-13F能有效诱导Lewis肺癌细胞凋亡。CIP-13F能有效抑制HUVEC体外成管型。免疫组化法检测CD34表达水平评价肿瘤微血管密度MVD,显示CIP-13F能有效降低Lewis肺癌组织的MVD。另外,Western blotting结果显示,CIP-13F能降低Lewis肺癌组织中血管生成相关因子VEGF、bFGF和TGF-a的表达水平。结论：环酰亚胺类肽化合物CIP-13F通过抑制APN的表达水平和活性,抑制肿瘤细胞的增殖和转移。CIP-13F能有效的抑制移植瘤鼠的腋部原发肿瘤灶的生长,降低肺继发转移灶的数目。CIP-13F用于治疗APN表达阳性的肿瘤有良好的应用前景。