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热休克蛋白70(HeatShockProtein70,HSP70)是HSP70家族的成员，进化上高度保守，其结构主要由一个N端高度保守的ATPase功能域和一个C端区域组成，C端区域又可以分成一个保守的多肽结合功能域和一个不保守的靠近C端的可变区功能域。它具有分子伴侣功能，在肿瘤免疫中极可能是“肿瘤抗原”或“肿瘤抗原载体”，而且它也是细胞凋亡信号通路中重要的调节者。TRAF6(tumornecrosisreceptorassociatedfactor6)是在1996年通过用CD40制成的探针，采用酵母双杂交的方法筛选得到的。其结构主要由N端的Ringfingerdomain、Zincfingerdomain和C端的Coiled-coildomain、TRAF-Cdomain组成。它识别并结合CD40及TRANCE-R受体质膜区域的多肽结构域(PXEXXAr/Ac，Ar代表芳香族氨基酸，Ac代表酸性氨基酸)，外界刺激引起TRAF6与CD40或TRANCE-R结合从而激活NF-κB及MAPKs。此外，与其它家族成员不同，TRAF6还参与调节IL-1R/TLR家族信号通路。LPS(Lipopolysacchride，脂多糖，又称内毒素)，是格兰氏阴性菌细胞外膜的主要成分，单核细胞通过表达多种炎症因子协调对LPS的先天性免疫应答。LPS通过TLR4激活细胞，MyD88与TLR4结合后，IRAK随之与这一复合物结合，所形成的复合物不与IKK复合物直接发生联系，而是将信号传导到并激活TRAF6，在这一过程中需要TRAF6的泛素化，泛素化的TRAF6激活了一种称之为TAK1的MAP3K激酶，TAK1随之将IKKβ磷酸化，激活后的IKKβ最终导致了NF-κB(Nuclearfactor-κB)的激活。NF-κB是在1986年由Sen和Baltimore首先报道的，它是前炎症因子基因表达调节的关键成分之一，它诱导前炎症细胞因子、趋化因子、粘附分子等的表达。近十几年来，人们对以NF-κB为核心的信号转导系统有了些较为深入的了解，其激活过程和其所调控的基因功能以及与人类疾病的关系也逐渐为人们所认知，但这一信号调节网络还有许多方面需要做更进一步的研究。
本实验旨在研究HSP70对LPS激活NF-κB信号通路的调节作用，为LPS急性炎症反应的治疗提供理论依据。本实验成功克隆了HSP70以及TRAF6多种缺失变体的真核表达载体，并通过磷酸钙共沉淀法将其转染入HEK293细胞中研究HSP70与TRAF6的结合情况，结果发现HSP70的ATPase功能域及多肽结合功能域和TRAF6的TRAF-C区域特异性地结合，并且HSP70通过此种结合调节TRAF6介导的LPS激活的NF-κB信号通路。此外，为了解决Raw264.7细胞的转染难题，通过脂质体介导将HSP70/pcDNA3质粒转染入Raw264.7细胞，并加入G418筛选得到HSP70稳定表达的细胞株，将此细胞株用于HSP70对LPS激活NF-κB信号通路作用的研究，结果发现HSP70对此通路起抑制作用。