论文部分内容阅读
原花青素(OPC)具有抗氧化、抗糖尿病、抗癌症、神经保护等多种生理功能,但较强的生物活性对pH、温度和光敏感,使它们在食品、医学、化妆品等行业的应用受到局限。因此,可以通过制备纳米粒子对OPC进行负载保护。透明质酸作为天然多糖具备较好的生物相容性,但未经修饰的透明质酸难以应对酸、碱、热等不利环境,可以通过对其主链上的化学基团进行修饰提高其稳定性后制备成纳米粒。响应性纳米粒具有发展前景,能够通过主动靶向和特定部位结合,再利用载体对环境的响应性完成可控制释放芯材的目的,有效解决芯材在机体内运输和释放问题。本文以透明质酸为原料,基于机体中的微环境制备具有pH/谷胱甘肽响应性的聚合物纳米粒,对OPC进行包埋并进行相关性能的研究。主要研究内容和结果如下:1、选择超声辅助的方法利用组氨酸对透明质酸进行改性赋予其pH响应特性,探究超声功率、温度、时间、组氨酸和透明质酸之间的底物质量比等条件对接枝物的影响。通过响应面分析法对合成过程中的超声功率、反应温度、底物质量比进行优化,得到接枝物最佳反应条件为超声功率249 W,反应温度48℃,底物质量比3.1,反应时间40 min,预测接枝度为36.8%。再以N’N-双丙烯酰胱胺为交联剂,催化剂的作用下,在合成物质中引入二硫键,赋予聚合物谷胱甘肽敏感性。通过质子缓冲能力测试和还原降解实验来初步探测合成物质是否具有响应特性。并结合红外光谱、热重分析、差示扫描量热法、X射线衍射、扫描电镜等对合成物质进行基本表征。2、利用超声分散法制备具有pH/谷胱甘肽双响应性的纳米粒,当超声功率为180 W,超声时间为10 min,制备的纳米粒平均粒径为162 nm,PDI值为0.254。通过探究不同pH、GSH浓度对纳米粒的影响来检测纳米粒的响应性,当pH从5.0增加到7.5时,纳米粒的平均粒径和PDI不断减小,Zeta电位的绝对值不断增大;随着GSH浓度由10μM增加到10 mM,平均粒径和PDI也不断增加,并且纳米粒在较高温度和肠胃环境下能够保持一定的稳定性。3、以OPC为芯材进行包埋,包封率达到88.5%。通过包埋可以延缓OPC在热处理过程中抗氧化性能的降低,一定程度下能防止食品防腐剂对OPC的破坏。在pH=5.8,GSH浓度为10 mM的条件下负载OPC纳米粒的释放率达到最高,在30 h累计释放率达到78.4%。通过MTT法检测负载OPC纳米粒对结肠癌CMT93细胞的毒性作用,负载OPC纳米粒随着OPC浓度的增加呈现出抑制率增加的趋势,随着孵育时间的延长,细胞毒性也越大。BAC-HA-His纳米粒的细胞相容性分析结果表明,在浓度为1 mg/mL的BAC-HA-His纳米粒对细胞处理72 h后,依然保持85%的存活率,说明该纳米粒载体无毒,细胞相容性较好。