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目的: (1)观察共表达质粒pcDNA3.1-U6si-VEGF-p53 (Pvp53)对前列腺癌细胞株PC-3的联合治疗作用。(2)观察以减毒沙门氏菌为运载体携带共表达质粒Pvp53治疗裸鼠前列腺癌移植瘤的效果(。3)探讨高表达p53蛋白及沉默VEGF基因的协同作用及其机制,为前列腺癌基因治疗提供新的实验依据。方法:免疫组化检测人正常前列腺组织、前列腺癌组织的mt-p53和VEGF的表达;基因重组技术构建可同时表达siRNA-VEGF与p53的质粒pcDNA3.1-U6si-VEGF-p53(Pvp53);通过细胞转染技术将共表达质粒Pvp53转入前列腺癌PC-3细胞;MTT法检测共表达质粒Pvp53对PC-3细胞增殖活性的影响;吖啶橙/溴化乙啶染色和流式细胞术检测共表达质粒Pvp53对PC-3细胞凋亡的影响;划痕实验与Transwell实验检测共表达质粒Pvp53对PC-3细胞迁移和侵袭的影响;RT-PCR和Western blot检测共表达质粒Pvp53对p53和VEGF及其相关基因转录水平和蛋白水平的表达;应用减毒沙门氏菌(PhoP/PhoQ)携带共表达质粒Pvp53治疗裸鼠前列腺癌移植瘤,观察其对移植瘤生长的影响及探讨其机制。结果:免疫组化结果表明mt-p53和VEGF在前列腺癌中呈高表达;基因重组技术成功构建了共表达质粒pcDNA3.1-U6si-VEGF-p53(Pvp53);MTT结果证实共表达质粒Pvp53对PC-3细胞有抑制增殖作用;吖啶橙染色和流式细胞术结果表明共表达质粒Pvp53对PC-3细胞有促进凋亡作用;划痕实验与Transwell实验结果显示共表达质粒Pvp53有抑制PC-3细胞迁移和侵袭的作用;半定量RT-PCR和Western blot结果显示共表达质粒Pvp53促进了Bax,Caspase3的表达,抑制了Bcl-2,VEGF,HIF-1α, MMP2,MMP9的表达;以减毒沙门氏菌为运载体携带共表达质粒Pvp53可以到达肿瘤部位,共表达质粒Pvp53明显抑制了裸鼠前列腺癌移植瘤的生长。结论:本研究首次成功构建了siRNA-VEGF与p53共表达质粒pcDNA3.1-U6si-VEGF-p53(Pvp53),二者的协同作用在体内外对前列腺癌显示了良好的治疗效果,其机制之一可能与p53激活了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax比值降低,最终激活Caspase3,促进肿瘤细胞的凋亡有关,另一方面可能siRNA VEGF直接抑制了VEGF的表达,并且通过p53抑制HIF-1α的表达,进而抑制VEGF的转录,两者协同有效的抑制了VEGF的表达,随后使MMP2和MMP9的表达下降,从而抑制了肿瘤细胞的迁移和侵袭。应用减毒沙门氏菌作为共表达质粒的运载体,可以携带目的基因到达肿瘤部位,其特点是在实体肿瘤内高度聚集,发挥抑制和杀灭肿瘤细胞的作用。该项研究为临床肿瘤的生物基因治疗奠定了实验基础。