嗜肺军团菌高温胁迫反应相关基因的筛选

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嗜肺军团菌(L.pneumophila)是一种在水环境中普遍存在的革兰氏阴性细菌,能够在水中长期存活,并能适应高水温的环境。在适当的条件下可以进入宿主细胞内进行胞内增殖,对人体肺部的侵染能够导致一种名为“军团病”的非典型肺炎。本研究首先构建了缺乏启动子的以gfpmut2为报告基因的质粒载体pBG01,并在此基础上构建军团菌基因组的启动子文库。然后以42℃为高温胁迫反应条件,筛选被抑制或者被诱导表达的启动子片段,经过多轮筛选,一共获得7个候选转化子。通过从L.pneumophila的基因组序列中搜索分析,选择其中的flgM鞭毛合成的负调控因子(anti-sigma28因子)进行了初步的分析。用相关的软件分析、预测其启动子序列的特征,并将L.pneumophila与其他病原菌中的FlgM氨基酸序列进行比对,分析其保守区域。FlgM调控FliA(sigma28因子)的机制在沙门氏菌等病原菌中研究比较深入,但在军团菌中尚未有相关报道。本研究结果显示,当温度从37℃上升到42℃时,flgM的转录和表达被抑制,这与沙门氏菌、耶尔森氏菌的表现是一致的。由于在L.pneumophila中,FliA除了是传统定义的鞭毛转录因子外,还与侵染期相关毒力表型以及抵抗逆境能力的调节有关,因此,在高温胁迫条件下,flgM的转录降低是与fliA的大量表达抵抗逆境的需要相关的。
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