论文部分内容阅读
甘蔗花叶病毒是马铃薯Y病毒属的成员，能够被蚜虫非持久性传播，主要危害玉米和高粱，造成严重的经济损失。甘蔗花叶病毒基因编码的HC-pro是和蚜虫传播相关的一个蛋白因子，并且和病毒自身的许多生命活动相关。本试验通过设计特异性引物，利用RT-PCR技术从陕西玉米病株上克隆了甘蔗花叶病毒中HC-pro基因，并进行了原核表达研究，同时提纯了甘蔗花叶病毒。 分离得到的玉米花叶病原，通过生物学，电镜等方法鉴定为甘蔗花叶病毒；提纯病毒电镜观察表明其大小为720～760×13nm，紫外扫描分析呈典型的核蛋白吸收曲线，OD280／OD260=0.69。以其为材料，接种玉米后，提取病株RNA；优化扩增体系，RT-PCR反转录扩增获得大约1.4kb左右的SCMV的HC-pro基因片断。克隆测序后得到1380bp的甘蔗花叶病毒陕西分离物HC-pro基因序列。将该基因序列登录到GenBank，登录号为DQ667961。该序列与其它株系核苷酸和氨基酸同源性分别为Shandong株系(91.7％／99.3％)、Henan株系(91.6％／99.3％)、Beijing株系(90.9％／98.7％)、Mexico株系(89.0％／98.9％)、Zhejiang株系(88.8％／98.0％)、Guangdong株系(83.3％／96.1％)、Lingpin株系(81.2％／95.4％)、Yuhang株系(81.0％／95.2％)用pET30a构建含HC-Pro的原核表达载体pETHC。转化大肠杆菌BL21诱导表达HC-pro。SDS-PAGE电泳检测表达的HC-pro蛋白大小约57kDa与预测相符合。通过一系列的梯度试验发现，在不同的预培养时间下，原核表达载体pETHC对HC-pro蛋白的表达丰度不同。 本研究提纯了SCMV，克隆了SCMV shaanxi株系HC-pro基因，并首次对SCMVHC-pro进行了原核表达，为进一步的同源性分析和蚜传专化性位点的分析，以及分离提取蚜传受体蛋白，并通过基因工程和分子生物学技术为蚜虫受体蛋白的研究打下了坚实的基础。