论文部分内容阅读
PiggyBac转基因载体系统作为高效的昆虫转基因载体在昆虫转基因操作方面被大量运用。本研究的目的就是利用较成熟的转基因等生物工程技术，将外源性纤维素酶导入家蚕基因组，进而产生可表达外源纤维素酶并可稳定传代的家蚕新品种。经基因工程改造的家蚕即可利用纤维素作为碳源，提高其对桑叶的利用率。
结论：
1.通过检索桑天牛纤维素酶基因，完成全长纤维素酶cDNA的克隆，进而构建PiggyBac转座子载体，采用显微注射方法将转座子转入家蚕卵内。
2.通过观察发育中的卵和幼虫的眼部和神经管的荧光显色来鉴定转基因的成功与否，采用酶活测定方法鉴定外源基因AgEGaseI基因在转基因家蚕中的表达情况。
3.由PiggyBac载体上3×P3启动子引发的绿色荧光表达在卵和幼蚕的神经系统，绿色荧光的表达标志着转基因载体已经成功导入了家蚕基因组内，并与之发生了整合。经基因组PCR鉴定比较后证明在转基因处理后的家蚕体内含有目的基因AgEGaseI。
4.利用不同组织匀浆液进行纤维素酶的酶活测定，利用AgEGaseI对CMC底物的作用生成葡萄糖的反应证明了在转基因家蚕体内确实含有具有活性纤维素酶。