论文部分内容阅读
目的:探求骨涎蛋白对人牙髓干细胞(dental pulp stem cells，DPSCs)增殖和成骨向分化的影响。优化人牙髓干细胞成骨诱导的效率，为优化组织工程治疗牙槽骨缺损提供参考。 方法:哈医大二院口腔颌面外科门诊采集因正畸拔除的前磨牙或阻生第三磨牙，采用胰酶消化并过滤得到人牙髓干细胞。将人牙髓干细胞分别接种于含有不同浓度诱导液的培养瓶中，MTT法检测骨涎蛋白对细胞增殖能力的影响，碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性，从上述实验获取骨涎蛋白的最佳诱导浓度。以含有最佳浓度的骨涎蛋白的矿化培养液作为实验组，以普通矿化培养液作为对照组。茜素红染色检测成骨分化情况，反转录聚合酶链反应分别检测Ⅰ型胶原、骨钙蛋白、Runx-2转录因子等骨源性基因的表达情况。 与牙髓干细胞共培养做为实验组，单纯DPSCs细胞培养作为对照组1，矿化液培养牙髓干细胞作为对照组2。实验组分别与对照组1，对照组2进行比较。光学显微镜和透射电镜下观察细胞形态以及超微结构变化;MTT法:比较共培养法与单纯牙髓干细胞培养、成骨细胞细胞的增殖速度，检测共培养细胞生长状态;茜素红染色法检测矿化结果;RT-RCR(Reverse transcriptase polymerase chainreaction)分别检测骨钙蛋白(Osteocalcin，OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-1，Col-1)、Runx-2转录因子等骨源性基因表达情况。 结果:7天后可见骨涎蛋白浓度为1×10-9/L时，抑制作用最明显。骨涎蛋白促进人DPSCs向成骨细胞分化，其中，1×10-10mol/L骨涎蛋白促进ALP活性的作用最明显。骨涎蛋白诱导培养人牙髓干细胞28天后，部分细胞变为多角样以及椎体样成骨细胞形态，并产生白色点状晶体。茜素红染色实验显示光镜下可见团状红色矿化结节。目的骨源性基因表达阳性率明显。 结论:骨涎蛋白抑制人牙髓干细胞增殖;适宜浓度骨涎蛋白能增强人牙髓干细胞成骨诱导效率;使牙髓干细胞成骨的诱导条件得到进一步优化。