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目的:LKB1(Liver Kinase B1)和PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)是调控mTOR(mammalian Target of Rapamycin)信号通路的两个抑癌因子。LKB1胚系突变导致普杰二氏综合症(Peutz-Jeghers Syndrome，PJS)，PTEN胚系突变导致常染色体显性遗传病考登症(Cowdens Disease，CD)，这两种疾病具有相似的临床表征。一系列研究结果提示LKB1和PTEN之间可能存在相互作用。本研究通过构建DsRed2-PTEN-LKB1三顺反子表达载体并转染HeLa细胞，探究LKB1与PTEN之间的相互关系。 方法:以人肝总RNA为模板通过反转录PCR获得eDNA模板，通过PCR分别扩增得到lkb1、Pten基因序列，以pIRES2-EGFP载体为模板通过PCR扩增获得IRES2片段。利用pIRES2-DsRed2载体构建多顺反子表达载体pIRES2-DsRed2-LKB1（缩写为pIRL）、pIRES2-DsRed2-PTEN（缩写为pIRP）和pIRES2-DsRed2-PTEN-IRES2-LKB1（缩写为pIRPIL）。通过观察红色荧光结合Westernblot检测确定双顺反子和三顺反子载体转染HeLa细胞后目的蛋白获得表达，进一步通过检测LKB1对PTEN磷酸化水平及磷酸酶活性的影响来探究LKB1与PTEN间的作用。 结果:通过PCR扩增成功获得了lkb1、Pten基因序列和IRES2序列。基于pIRES2-DsRed2载体成功构建了多顺反子表达载体pIRL、pIRP和pIRPIL，并且测序结果表明插入片段为完全正确序列。pIRL、pIRP质粒转染HeLa细胞后检测到红色荧光，Western blot结果表明目的蛋白均获得表达，PTEN磷酸化和磷酸酶活性检测结果表明LKB1能显著提高PTEN的磷酸化水平和磷酸酶活性。 结论:LKB1和PTEN之间存在相互作用，LKB1可以调节PTEN的磷酸化水平和磷酸酶活性。