论文部分内容阅读
目的:老年性骨质疏松大多数是一种低转换型骨质疏松,现有的动物模型存在着一定的缺陷<[1]>,特别是对男性老年性骨质疏松动物模型,目前尚无理想的经济的模型用于男性抗骨质疏松药物的筛选.方法:1 D-半乳糖建立老年性骨质疏松动物模型实验3月龄SD普通级大鼠42只,雌雄各半,按体重随机分成5组,对照组、去睾丸或去卵巢组和D-半乳糖低(50mg.kg<-1>.d<-1>)、中(100mg.kg<-1>.d<-1>)、高(200mg.kg<-1>.d<-1>)5个组,前两组分别皮下注射生理盐水、后三组分别皮下注射三个不同浓度的D-半乳糖.两个月后心脏取血处死大鼠,取出左侧股骨和胫骨,胫骨脱水包埋切片,用骨形态计量学方法测量骨的静态参数和动态参数,股骨称其干重后,用6N的盐酸消化,ICP测其Ca、P等离子浓度.同时取出卵巢和睾丸制作软组织石蜡切片,在光学显微镜下观察组织学和病理学的变化.大鼠分别处死前14、13天皮下注射四环素,前4、3两天皮下注射钙环绿素进行体内荧光标记.2 D-半乳糖性导致雄性大鼠骨质疏松的机制研究6月龄SD普通级雄性大鼠30只,按体重随机分成5组,对照组、模型组、脑复康低剂量组、脑复康高剂量组、司坦唑醇组5个组,对照组皮下注射生理盐水、模型组和用药组分别皮下注射D-半乳糖120mg.kg<-1>.d<-1>,为了与用药组处理因素相对照,两组均生理盐水灌胃.用药组分别给予脑复康低剂量500mg.kg<-1>.d<-1>,脑复康高剂量1000mg.kg<-1>.d<-1>,司坦唑醇600 mg.kg<-1>.d<-1>,分别用10％的脑复康,20％的脑复康和12.5％的司坦唑醇灌胃,灌胃体积5ml/kg,每天给药一次.两个月后心脏取血处死老鼠,并同时用2％-2.5％的多聚甲醛-戊二醛溶液心脏灌注,在四分钟内取出脑,放入2.5％戊二醛溶液中后固定,根据脑定位图谱,取出弓状核,电镜观察弓状核细胞结构.同时取出左侧股骨、胫骨和第四腰椎,进行骨形态计量分析.同时还取出肝、胸腺、肾上腺、睾丸称重,睾丸称重后放入10％福尔马林中固定制作软组织石蜡切片,在光学显微镜下观察组织学和病理学的变化.用放免测定血清睾酮和促黄体生成素(LH),化学发光法测定血清血糖含量、过氧化氢酶(CAT)的活性.处死大鼠前用双荧光标记法对骨组织进行标记.3.D-半乳糖对成骨细胞的影响从新生SD大鼠的颅盖骨中获取成骨细胞,按文献【】方法进行细胞培养,在培养细胞中加入不同浓度的D-半乳糖,用MTT法测定细胞增殖,PNPP法测定细胞ALP活性.观察D-半乳糖对原代培养成骨细胞的影响.结论:D-半乳糖对雌性大鼠骨无明显影响,但能使雄性大鼠骨产生骨丢失,呈现低转换型的骨质疏松症.D-半乳糖可致雄性大鼠弓状核发生衰老样变化,睾丸老化,睾酮分泌降低;过氧化氢酶活性降低等,这些结果提示了D-半乳糖产生低转换型骨质疏松症的主要机制,可能是通过影响下丘脑-垂体-性腺轴导致骨质疏松,D-半乳糖导致了脑老化和对抗了雄激素的骨合成作用.司坦唑醇可预防D-半乳糖导致的低转换型的骨质疏松.大鼠骨量升高,血清睾酮升高,血清LH降低.其作用机制可能与提高大鼠体内雄激素的含量有关.脑复康也可预防D-半乳糖导致的低转换型的骨质疏松症.大鼠骨量升高,弓状核结构与对照组相当,但其血清睾酮不升高,血清LH含量不变,以上结果提示其作用机制可能与抗脑老化有关.体外实验显示,D-半乳糖对成骨细胞有提高碱性磷酸酶作用,但对其增殖无明显作用,进一步说明其对雄性大鼠导致的低转换型的骨质疏松症,不是通过抑制成骨细胞活性,而是通过中枢神经和性腺等途径实现的.