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地鳖虫是一种传统的中药材，具有散淤血、解凝活血、接骨续筋、消肿止痛等功效。现代研究发现，地鳖虫还有调节血脂、溶血栓、抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抑制乙酰胆碱酯酶活性等功效。中华真地鳖(EupolyphagasinensisWalker)是地鳖虫中药食兼用的一个种，干品蛋白质含量高达60％以上，氨基酸种类齐全，并且含有丰富的脂肪酸和微量矿物质元素。随着人们对中华真地鳖药用价值和营养价值的认识，其养殖规模不断扩大，成为农民增收的新途径。但是其利用还停留在全虫入药或油炸地鳖、地鳖浸泡酒等传统方式，这些不能满足现代社会不同层次的消费要求，并制约着中华真地鳖产业的发展。高蛋白的中华真地鳖是生物活性肽的优良原料，将其精加工成具有高附加值的生物活性肽，可以丰富抗氧化肽的种类，发展中华真地鳖产业。
本文以中华真地鳖为研究对象，经脱脂、酶解、超滤后得中华真地鳖酶解物，研究其体外、体内抗氧化活性。并采用阴离子交换层析、凝胶层析、反相高效液相、质谱等方法，对活性较高组分进行分离纯化和氨基酸序列鉴定。结果如下:
1.采用从蜘蛛肠道分离的Arazyme蛋白酶酶解中华真地鳖蛋白，将酶解物超滤、冷冻干燥后得到中华真地鳖酶解物。研究其自由基清除能力、还原能力和对脂质过氧化的抑制能力。结果表明，其对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)、羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)均有较强的清除能力，IC50分别为1.32、0.40和8.73mg/mL;肽含量为1.8mg/mL时，还原能力达0.3152;向亚油酸自氧化体系中加入含2mg多肽的酶解物后，其对亚油酸自氧化反应的抑制率达88％，效果好于2mg的α-生育酚。说明中华真地鳖酶解物具有较强的体外抗氧化活性。
2.将中华真地鳖酶解物灌胃D-半乳糖致衰老小鼠，测定小鼠血浆和肝脏组织中丙二醛(MDA)含量、·OH清除能力以及总过氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活力，结果显示，与模型组相比，小鼠血浆和肝脏组织匀浆中MDA含量极显著(P＜0.01)降低，对·OH的清除能力显著(P＜0.05)增强，其T-SOD(P＜0.05)、GSH-PX(P＜0.01)和CAT(P＜0.05)活力显著升高。说明中华真地鳖酶解物能显著抑制D-半乳糖致衰老小鼠的衰老。
3.将中华真地鳖酶解液在4℃放置12h，分为沉淀(F1)和上清液(F2)两部分。利用RP-HPLC对F1进行分离，得到纯度较高的组分F1-1，其浓度在100μm/mL时对DPPH·的清除率为53.30％。经鉴定其分子量为335.03，氨基酸序列为天冬氨酸-缬氨酸-半胱氨酸（Asp-Val-Cys）;利用DEAE-SephadexA-50离子交换层析、SephadexG-15凝胶以及RP-HPLC对中华真地鳖多肽F2进行分离。阴离子分离得到3个组分，组分F2-2对DPPH·、·OH和O2-·的清除能力最强，IC50分别为1.09、0.27和5.98mg/mL;凝胶分离F2-2得到3个组分，F2-2-3对DPPH·、·OH和O2-·的清除能力最强，IC50分别为272.13、117.91和1600μg/mL;RP-HPLC分离F2-2-3得到纯度较高的F2-2-3-3，其对DPPH·的清除率为45.33％（100μm/mL），经鉴定其分子量为2161.50。