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第一部分心肌肌球蛋白特异性T细胞分化介导心肌炎症反应机制研究目的观察心肌肌球蛋白特异性T辅助细胞(T helper cells,Th cells)过继转输后受者大鼠的心肌炎症反应,探讨参与心肌炎症反应和心肌损伤的Th细胞类型,揭示急性心肌梗死后(acute myocardial infaction,AMI)心肌损伤的免疫学机制。方法采用心肌肌球蛋白体外诱导Th细胞分化,将分化成功的Th1、Th2细胞分别过继转输给同源近交系大鼠,未活化的T细胞作为对照。按接受转输细胞的类型将受者大鼠分为3组(Th1组、Th2组和对照组),分别在转输后3天、1周、4周和8周处死大鼠(每个时间点6只)观察心肌炎症反应。采用HE染色观察淋巴细胞浸润情况,RT-PCR和免疫组化方法分别检测各组大鼠心肌炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的基因和蛋白水平表达。结果Th1组3天时仅有少量淋巴细胞浸润;1周时炎症最重,淋巴细胞浸润明显,伴有局灶性心肌炎和血管周围炎,局部心肌变性和点状坏死;4周时病变较1周减轻,但仍可见部分淋巴细胞浸润;8周时淋巴细胞基本消失。所有炎性因子的表达和淋巴细胞浸润的时间趋势一致。Th2组和对照组均未见明显的淋巴细胞浸润和炎性因子的表达变化。结论Th1细胞可通过增加淋巴细胞浸润和炎性因子表达来介导心肌炎症反应的发生。第二部分心肌肌球蛋白特异性T细胞分化介导心肌重塑免疫机制研究目的观察心肌肌球蛋白特异性Th细胞过继转输后受者大鼠的心肌重塑效应,探讨参与心肌重塑的Th细胞类型,揭示急性心肌梗死后心肌重塑的免疫学机制。方法采用心肌肌球蛋白体外诱导Th细胞分化,将分化成功的Th1、Th2细胞分别过继转输给同源近交系大鼠,未活化的T细胞作为对照。按接受转输细胞的类型将受者大鼠分为3组(Th1组、Th2组和对照组),分别在转输后3天、1周、4周和8周(每个时间点6只)观察心肌重塑情况。采用RT-PCR检测各组大鼠心肌α-肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)和B-MHC、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2及其组织抑制因子(tissue matrix metalloproteinase inhibitor,TIMP)-2 mRNA的表达,TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated digoxigendeoxyuridinetriphosphate nick end labeling,TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况,血流动力学和超声心动图评价左室功能。结果Th1组的α-MHC和β-MHC mRNA在3天和1周时与对照组相比无显著差别,在4周和8周时α-MHCmRNA水平降低,而β-MHCmRNA水平升高;MMP-2和TIMP-2mRNA的表达在3天时无明显变化,但MMP-2 mRNA在1周时明显增加,4周时开始下降,但仍高于对照组,8周时基本回到基线水平;TIMP-2mRNA水平直到转输后4周才明显上升,8周时达到高峰;Th1组各时间点都可以观察到凋亡心肌细胞,但以1周和4周最为明显;血流动力学检测发现Th1组大鼠左室压力最大变化速率线(士dp/dtmax)在转输后1周开始下降,8周时仍低于对照组。Th2组和对照组均未见上述重塑现象的发生。结论Th1细胞可以通过上调MMP,诱导心肌细胞凋亡和胚胎基因再表达,降低心肌收缩力等途径参与心肌重塑,这一效应可能和其介导炎症反应有关。