【摘 要】
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血管钙化是动脉粥样硬化、糖尿病、慢性肾病等多种疾病的病理特征。血管钙化形成的一个中心环节就是血管平滑肌细胞(VSMCs)向成骨细胞分化。炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α(T
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血管钙化是动脉粥样硬化、糖尿病、慢性肾病等多种疾病的病理特征。血管钙化形成的一个中心环节就是血管平滑肌细胞(VSMCs)向成骨细胞分化。炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)能诱导VSMCs向成骨细胞分化,促进血管钙化。硒是哺乳动物所必需的一种微量元素,它在生物体中以硒蛋白的形式发挥生理作用。SelS是硒蛋白家族中的一员,已有研究表明,SelS能够参与炎症调节。我们采用?-甘油磷酸钠诱导VSMCs体外钙化,初步探究了SelS、炎症、血管钙化之间的关系,取得了如下结果: 1.通过RT-PCR和蛋白质印迹技术初步探索了大鼠SelS基因的有效沉默片段。经过大量的实验探索,初步的结论为:在所设计的五条siRNA片段中,编号为siRNA-148沉默效果最佳,其序列为:Sense:5’-GCGUCCUUCUCUACAUUGUTT-3’;Antisense:5’-ACAAUGUAGAGAAGGACGCTT-3’。 2.初步数据显示,SelS沉默后,钙化的VSMCs的ALP活性降低,钙化标志蛋白cbfa-1、ColI基因表达下降,但基质钙沉积增加。这些结果表明SelS可能有抑制血管钙化的作用,但其作用机理有待进一步研究。 3.与先前文献报道一致,我们研究发现,TNF-α能够增强钙化VSMCs中ALP活性及cbfal的表达,表明TNF-α在体外促进VSMCs向成骨细胞分化。 4.用siRNA-148片段使SelS基因沉默后,TNF-α促进VSMCs向成骨细胞分化作用减弱,表现为ALP活性及cbfal的表达均显著下降。但是,通过对基质钙含量的测定发现,SelS基因沉默使TNF-α促进钙化的能力进一步增加,表明SelS可以抑制TNF-α诱导的钙化。这只是初步结果,还需要大量的实验进一步证实。 5.将钙化的VSMCs用亚硒酸钠预处理24h,再用TNF-α作用细胞。发现亚硒酸钠能够抑制TNF-α诱导的ALP活性的增强,并且100nmol/L的亚硒酸钠效果最为显著。这表明亚硒酸钠可能能够抑制TNF-α诱导的血管钙化。
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