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随着人民生活水平的提高、生活模式的改变及社会老龄化，糖尿病的发病率呈逐年上升的趋势。由于其发病率高，病程长，并发症多见，因而导致患者的生活质量降低，也带来严重的经济重担。目前研究表明，中医药治疗糖尿病有很好的疗效，可以改善临床症状。升清降糖合剂经中医临床实践检验发现有很好的改善糖尿病患者全身的状况，提高生活质量。为了进一步研究其机理，我们从保护胰岛细胞入手，了解其抗细胞凋亡的作用，并探讨其保护胰岛细胞的可能机理，为临床用药和糖尿病的治疗提供新的思路。
目的：
1．观察升清降糖合剂(SQ)对胰岛β细胞损伤模型活性的影响；
2．探讨升清降糖合剂对细胞凋亡率、对细胞上清液中NO含量的影响，揭示其抗凋亡和抗氧化的作用；
3．研究SQ对NFκB的影响，揭示调节免疫和抗凋亡的信号通路；
4．探索SQ抗糖尿病的可能分子机制；
方法：
1．称取原方比例升清降糖合剂(SQ)，研末，过筛，以半仿生提取法设计提取条件，常压下加热回流提取，合并三次煎液，过滤旋转蒸发浓缩，即得复方有效成分；
2．利用不同浓度和时间STZ诱导大鼠胰岛细胞瘤株(RINm5F)损伤，CCK-8法检测细胞活性，以达到IC50做为干预条件，确定损伤模型的成功；
3．以PBS配成不同浓度SQ，干预正常细胞，以CCK-8法检测细胞的增殖率，确定SQ对正常细胞的作用；
4．以PBS配成不同浓度SQ，干预模型组细胞，以CCK-8法检测细胞的增殖率，并用倒置显微镜形态学观察，确定SQ的最佳保护剂量；
5．分模型组(STZ)、保护组(SQ+STZ)、正常组(PBS)，分别干预24h，紫外光分光光度法检测细胞上清液中的NO的含量，细胞流式检测仪检测细胞凋亡率，免疫荧光检测核转录因子NFκB表达的影响。
结果：
1．SQ的提取：以半仿生提取法成功提取复方有效成分，重复性好。
2．胰岛β细胞氧化损伤模型的建立：CCK-8法检测显示RINm5F增殖率随STZ干预浓度的增长而减少，呈直线负相关，P＜0.01，我们确定IC50即0.8mmol·L-1STZ干预24h为细胞损伤模型条件。
3．不同浓度的SQ对正常细胞活性影响：CCK-8法检测不同浓度SQ加入正常组24h的细胞增殖率。与正常组比较，加入SQ组的细胞增殖率无明显影响(P＞0.05)。
4．SQ最佳保护浓度的确立：CCK-8法检测不同浓度SQ加入模型组24h的细胞增殖率。其中400μg·ml-1SQ组较模型组活性明显升高，有显著统计学差异(P＜0.01)，且低浓度SQ对照组(100μg·m1-1)及中浓度SQ对照组（200μg·ml-1）对细胞活性影响不大(P＞0.05)，故以400μg·ml-1SQ组为保护治疗剂量。
5．细胞凋亡率：流式细胞术检测凋亡率提示模型组(13.3±2.21％)与阴性组比较，差异显著(P＜0.01)，与保护组(6.58±1.12％)有显著差异(P＜0.01)。
6．细胞培养液中NO含量测定：硝酸还原法测定细胞培养液中NO的含量，与正常组(170.571±7.23)比较，模型组(208.12±4.85)NO的含量明显上升，有统计学差异水平(P＜0.05)。与模型组比较，保护组(175.30±4.10)中NO含量下降，有统计学差异(P＜0.05)。
7．核转录因子NFκB荧光表达：模型组与正常组及保护组比较比较，在细胞胞内NFκB荧光表达下降，但统计学无差异；而在细胞核内，明显的可见模型组细胞核内表达较正常组增强。保护组与模型组比较，细胞核内NFκB荧光表达减弱。
结论：
1．半仿生提取法高效的保持了中医复方的有效成分，具有良好的稳定性和可行性，操作可重复性强，值得进一步工艺研究；
2．一定浓度的STZ可诱导胰岛β细胞凋亡，造成胰岛β造成氧化损伤，可能与NO对细胞毒性有关，并可能与核转录因子NFκB激活有关；
3．一定剂量SQ可保护胰岛β细胞的活性，抵御STZ对细胞增殖、生长的抑制，SQ具有抗氧化酶活性，抵制脂质过氧化损伤，参与凋亡早期的调节，通过减少NO的含量而减少细胞凋亡的发生；
4．SQ对核转录因子NFκB有着重要的调节作用，提示对NFκB途径的调节与抗炎症反应、抗氧化、抗凋亡有关。
我们推论，升清降糖合剂抗糖尿病与其抗氧化凋亡有关，另外可能与抑制NFkB活化有关，共同达到治疗糖尿病的作用。