临床送检林蛙细菌的分离鉴定及部分菌株药敏分析

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林蛙因其特有的药用价值与营养价值而日益被人们所重视。但是由于野生林蛙数量有限,随着生境不断遭到破坏和人类长期大量捕捉,野生林蛙资源数量急剧减少,陷于濒危的境况。林蛙产品市场需求严重处于供不应求的状态。因此,产业化,规模化的林蛙养殖业将是解决这一矛盾的最佳方法。但现阶段人工养殖林蛙存在多种问题,如放养密度过大,环境污染严重,食物单一等。造成林蛙多种疾病发生,如红腿病、脑膜炎、胃肠炎、烂皮病等。林蛙一旦发病,常造成大批死亡,且无有效的治疗方法和用药标准,严重影响蛙的生长发育和成活率,给林蛙养殖业带来巨大的经济损失。因此,本研究,为了更全面了解林蛙携带菌群及常见菌株的药敏性,加强对林蛙疾病的防控,减少经济损失及保护野生林蛙物种。本实验近三年内收集东北不同地区送检林蛙,分为活蛙和冰冻死蛙两种样本,通过无菌操作从肝脏及水肿液进行细菌分离鉴定。首先通过菌落及菌体的形态学初步分析,然后运用分子生物学技术,以提取各分离株核酸作为模板,通过16S rRNA通用引物PCR扩增出长度约1500bp左右的目的片段。目的片段经纯化、连接T载体、导入DH5α感受态,挑取多个单菌落进行序列测定。最后将其所测基因序列通过NCBI的Blast检索系统进行序列相似性比对及系统进化分析,探讨菌株在分类学上的准确地位及亲缘关系。同时通过VITEK2Compact全自动微生物分析系统,对部分菌株进行生化鉴定及药敏实验。比较两种鉴定方法的结果是否一致以及该菌药物敏感性的测定。结果表明:一共分离细菌42株,其中从活蛙体内分离两株细菌,分子生物学鉴定结果分别为嗜水气单胞菌和不动杆菌属细菌,序列相似性分别为100%、99%。生化鉴定结果与分子水平的鉴定基本一致。区别是该株不动杆菌属细菌生化鉴定为鲁氏不动杆菌,两菌株分别命名为bf003、bfzhl2。其余40株菌是从冰冻死蛙中分离,经分子水平鉴定结果具体如下:不动杆菌属11株,假单胞菌属3株,气单胞菌属2株等。本次研究揭示了林蛙携带菌群的情况,充实了关于林蛙疾病病原方面的研究,为以后林蛙疾病的诊断及预防提供依据。
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