【摘 要】
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目的:研究淫羊藿苷影响成骨前体细胞MC3T3-E1增殖和分化以及分子机制,为临床治疗骨丢失疾病筛选药物提供理论依据。方法:通过免疫荧光检测对照组和加入淫羊藿苷药物组Ki67的表达情况;通过Western blot检测对照组和加入淫羊藿苷药物组增殖相关基因cyclinD1、cyclinD2的表达情况;通过茜素红染色检测成骨前体细胞MC3T3-E1的分化和形成钙化结节的情况;ALP活性检测;采用RT-
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目的:研究淫羊藿苷影响成骨前体细胞MC3T3-E1增殖和分化以及分子机制,为临床治疗骨丢失疾病筛选药物提供理论依据。方法:通过免疫荧光检测对照组和加入淫羊藿苷药物组Ki67的表达情况;通过Western blot检测对照组和加入淫羊藿苷药物组增殖相关基因cyclinD1、cyclinD2的表达情况;通过茜素红染色检测成骨前体细胞MC3T3-E1的分化和形成钙化结节的情况;ALP活性检测;采用RT-PCR和Western blot法检测成骨相关基因(collagenⅠ、OPN、Runx2、OCN)的表达;明确淫羊藿苷对成骨前体细胞MC3T3-E1成骨分化作用的分子机制,通过Western blot检测与Hedgehog信号通路相关的基因(shh、Gli1、Gli3、PTCH2)表达情况,加入Hedgehog信号通路的抑制剂cyclopamine后通过茜素红染色和Western blot法进一步验证淫羊藿苷对成骨细胞分化影响的作用机制。结果:1.我们设置了对照组和加入淫羊藿苷的药物组,研究结果显示加入淫羊藿苷后Ki67免疫荧光明显增强,并且cyclinD1和cyclinD2的蛋白表达量明显增多。2.加入淫羊藿苷药物组的茜素红染色明显比对照组增强,ALP活性检测增高,成骨相关基因的RNA水平和蛋白表达量增多。3.与对照组相比,淫羊藿苷药物组的Hedgehog信号通路相关基因(shh、Gli1)蛋白表达量明显增多,Gli3、PTCH2蛋白的表达量大大减少。4.与淫羊藿苷药物组相比,抑制剂cyclopamine的加入使Hedgehog信号通路相关基因(shh、Gli2)表达量降低。结论:1.淫羊藿苷促进成骨前体细胞MC3T3-E1的增殖。2.淫羊藿苷促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。3.淫羊藿苷通过激活Hedgehog信号通路促进MC3T3-E1细胞的分化。4.抑制剂cyclopamine的加入抑制了淫羊藿苷促进成骨分化和成骨相关基因的表达的作用,进一步说明淫羊藿苷促进成骨分化至少部分是通过Hedgehog信号通路。
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