嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用

• 作 者: 刘黎
• 机 构: 宁夏医科大学
• 出 处: 宁夏医科大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: 嗜肺军团菌 巨噬细胞感染增强蛋白 蛋白表达 血清学诊断

目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白（macrophageinfectivity potentiator， MIP），研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E. coli BL21感受态细胞中,诱导MIP蛋白表达，运用SDS-PAGE电泳分析和亲和层析法纯化。用纯化的MIP蛋白作为包被抗原建立间接ELISA法，同时DRG的军团菌IgG/IgM/IgA试剂盒和R&D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测血清中的嗜肺军团菌特异性IgG、IgM、IgA抗体，然后对这两种方法进行比较，通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性，来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量（M_r）大约40000的MIP融合蛋白在E. coli BL21中表达并纯化。用以纯化蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法分别检测血清中嗜肺军团菌特异性IgG、IgM、IgA抗体。与DRG IgG/M/A试剂盒比较：灵敏度90.9%，特异度92.8%，一致性Kappa值0.837（P <0.05），ROC曲线下面积0.911。与ELISA试剂盒（R&D）进行比较：IgG抗体的灵敏度88.5%，特异度95.5%，一致性Kappa值0.846（P <0.05），ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%，特异度97.6%，一致性Kappa值0.88（P<0.05），ROC曲线下面积0.947。 IgA抗体的灵敏度90%，特异度95%，一致性Kappa值0.854（P<0.05）， ROC曲线下面积0.929。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化，运用MIP蛋白作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。