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目的①了解HBsAg阳性母亲新生儿脐血单个核细胞(CBMCs)表面Toll样受体3(TLR3)与乙肝疫苗无/低应答的关系。②探讨HBsAg阳性母亲新生儿脐静脉血CBMCs中相关免疫细胞与乙肝疫苗无/低应答的关系。③探索TLR3在HBsAg阳性母亲新生儿乙肝疫苗(HepB)无/低应答中可能的作用机制。方法①收集2011年7月-2012年5月于太原市第三人民医院妇产科分娩的HBsAg阳性母亲及其新生儿41对。采集新生儿出生时30mL脐血及3mL股静脉血。采用面对面问卷调查方法收集母儿的流行病学资料。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量PCR (FQ-PCR)检测母亲及其新生儿出生24小时内外周血乙肝病毒标志物及HBV DNA含量。②新生儿按照0,1,6程序完成乙肝疫苗全程免疫后,于新生儿12±1个月龄时采集其股静脉血5ml,采用化学发光法检测其血清中抗-HBs含量,了解HBsAg阳性母亲新生儿乙肝疫苗无/低应答率。③采用密度梯度离心法分离新生儿脐静脉血CBMCs,乙肝疫苗无/低应答组和高应答组均分为三组进行体外细胞培养,包括HBV(-)对照组、细胞培养24h、48h分别用PolyI:C、HBV刺激活化CBMCs的PolyI:C+HBV(+)刺激组、培养48h后仅用HBV进行刺激的HBV(+)刺激组。且于HBV刺激72小时后收集细胞。④采用多色流式细胞术(FCM)检测两组TLR3的蛋白表达水平以及DCs、T细胞、CD4+CD25+Treg和B细胞的百分比。结果①HepB高应答组CBMCs细胞经HBV以及PolyI:C+HBV刺激后TLR3蛋白水平均低于HBV(-)组；HepB无/低应答HBV感染组与HBV(-)组相比,TLR3蛋白水平较低,经PolyI:C刺激后,无/低应答组CBMCs细胞表面TLR3蛋白含量高于HBV(+)组。CBMCs经HBV和PolyI:C+HBV刺激后,细胞表面TLR3蛋白含量在HepB高应答组与无/低应答组之间差异无统计学意义(t=0.94, P=0.35;t=0.23,P=0.81)。②HepB高应答组经HBV以及PolyI:C+HBV刺激后mDC与pDC的比值均高于HBV(-)组；HepB无/低应答HBV(+)组mDC与pDC比值低于HBV(-),但高于PolyI:C+HBV(+)组。CBMCs经HBV和PolyI:C+HBV刺激后,mDC与pDC的比值在HepB高应答组与无/低应答组之间差异无统计学意义(t=0.27,P=0.78;t=0.33, P=0.78)。③HepB高应答组经HBV以及PolyI:C+HBV刺激后CD4+T细胞与CD8+T细胞比值低于对照组；HepB无/低应答HBV(+)组CD4+T/CD8+T比值高于HBV(-)组和PolyI:C+HBV(+)组。乙肝疫苗高应答组与无/低应答组CBMCs经HBV及PolyI:C+HBV刺激活化后,两组CD4+T与CD8+T细胞比值差异无统计学意义(t=0.54, P=0.58; t=0.40, P=0.68)。④HepB高应答组经HBV以及PolyI:C+HBV刺激后Treg细胞百分比均低于HBV(-)组；HepB无低应答HBV(+)组Treg细胞百分比高于HBV(-)组和PolyI:C+HBV(+)组。乙肝疫苗高应答组与无/低应答组CBMCs经HBV及PolyI:C+HBV刺激活化后,两组CD4+CD25+Treg细胞百分比差异无统计学意义(t=0.29, P=0.77; t=0.10, P=0.92)。⑤HepB高应答组经HBV以及PolyI:C+HBV刺激后B细胞百分比低于HBV(-)组；HepB无/低应答组HBV(+)组B细胞百分比高于HBV(-)组和PolyI:C+HBV(+)组。乙肝疫苗高应答组与无/低应答组CBMCs经HBV刺激后,两组B细胞百分比差异无统计学意义(t=0.12,P=0.87)。而经PolyI:C+HBV刺激活化,两组B细胞百分比差异有统计学意义(t=1.78,P=0.01)。结论①乙肝疫苗无/低应答对照组的TLR3蛋白略低于高应答组,在经PolyI:C刺激后其表达水平略高于高应答组,提示PolyI:C可作为TLR3配体提高无/低应答者CBMCs细胞表面的TLR3受体水平。②经PolyI:C刺激后乙肝疫苗无/低应答者CBMCs细胞表面TLR3蛋白表达水平略高于HBV(+)组,且mDC与pDC的比值、CD4+T/CD8+T的比值、Treg细胞百分比均低于HBV(+)组,而B细胞的百分比未随TLR3蛋白含量的变化而改变,提示新生儿TLR3蛋白表达与启动HepB无/低应答的细胞免疫应答有关。