动脉粥样硬化中高迁移率族蛋白B1与调节性T细胞的相关性研究

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目的:将动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)患者和健康人作为研究对象,检测两种健康状况的外周血中促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子含量的变化,以及研究对象中调节性T细胞和Th17细胞含量的变化,研究在动脉粥样硬化发生发展过程中高迁移率族蛋白-1(high mobility group box1 protein,HMGB-1)和Th17/Treg的平衡与AS形成的相互关系,探讨AS的致病因素,寻找可能存在的治疗靶点,并为防治动脉粥样硬化以及动脉粥样硬化所致的并发症提供实验基础和理论依据。  方法:实验设立对照组和AS组,检测健康人和动脉粥样硬化患者外周血中高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)和调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)以及Th17细胞之间的含量变化,(1)采用 Ficoll密度梯度离心法分别将动脉粥样硬化患者和健康人外周血分离得到人外周血单个核细胞(PBMCs)。(2)将分离出的单个核细胞采用磁珠分选法分选出调节性T细胞(Tregs)。(3)用流式细胞术检测磁珠分选所得CD4+T细胞和调节性 T细胞的纯度。(4)将不同浓度的 HMGB-1和 Treg细胞共培养,研究HMGB-1对Treg细胞的体外诱导分化,检测封闭TLR4受体和不封闭TLR4受体时培养上清液中细胞因子TGF-β1、IL-10含量的变化。(5)用酶联免疫吸附试验法分别检测动脉粥样硬化患者和健康人血清中的细胞因子TGF-β1、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23和HMGB-1的含量。(6)用SPSS18.0软件进行统计学分析。所得数据以x±s表示,两组之间的均数比较用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。  结果:  (1)AS患者外周血中的HMGB-1的含量比健康人外周血中的含量明显增高。  (2)AS组外周血中的TGF-β1和IL-10含量比对照组明显降低。  (3)AS组外周血中IL-6、IL-17A、IL-23的含量较对照组明显增高。  (4)随着HMGB-1的浓度逐渐增加,封闭TLR4受体的CD4+T细胞分泌IL-10的功能增强,随着HMGB-1刺激的浓度逐渐增加,未封闭TLR4受体的CD4+T细胞分泌IL-10的功能反而减弱。  (5)随着HMGB-1的浓度逐渐增加,封闭TLR4受体的CD4+T细胞分泌抑炎性细胞因子TGF-β1的功能增强,而未封闭TLR4受体的CD4+T细胞分泌TGF-β1的功能减弱。  结论:动脉粥样硬化患者外周血中促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子与健康人的水平存在较大的差异,本研究通过体外不同浓度的HMGB-1与CD4+T细胞共培养时,未封闭和封闭TLR4受体的CD4+T细胞分泌TGF-β1、IL-10的功能是不同的,随着的HMGB1刺激浓度增加,未封闭TLR4受体的CD4+T细胞的分泌功能减弱,而封闭TLR4受体的CD4+T细胞分泌功能增强。AS患者外周血中HMGB-1、TGF-β1、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23的含量与健康人之间差异较大,促炎性细胞因子水平明显升高,抑炎性细胞因子 IL-10、TGF-β1水平降低,使炎症反应增强,促进了动脉粥样硬化的发展。
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