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血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的异常增殖将导致高血压、动脉粥样硬化、冠心病、血管形成术后再狭窄等严重危害人类健康的疾病。目前研究证明,心血管系统疾病的形成机制有多种,而抑制VSMC的增殖一直是该领域的研究热点。替米沙坦是一种非肽类特异性血管紧张素Ⅱ受体(AngⅡ受体)(AT1型)拮抗剂,具有较好的心血管保护作用。本研究考察替米沙坦对人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及作用机制,宗旨在于为临床用药提供参考。 目的:考察替米沙坦对体外培养的人脐带动脉血管平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的抑制作用及作用机制。 方法:(1)采用组织块贴壁法对HUASMCs进行原代培养,并传代培养。传3代细胞用α-actin肌动蛋白免疫组化法进行细胞鉴定;(2)采用MTT比色法,检测同一浓度(50μg·mL-1)的替米沙坦在不同作用(3h~96h)时间和不同浓度(0.5~500μg·mL-1)的替米沙坦在同一作用时间(48h)对HUASMCs增殖的抑制作用;(3)通过RT-PCR方法,检测低、中、高(1、10、100μg·mL-1)3种浓度替米沙坦对HUASMCs表达血管内皮生长因子(VEGF)和白介素6(IL-6)mRNA的影响;(4)采用ELISA法,检测低、中、高(1、10、100μg·mL-1)3种浓度替米沙坦对HUASMCs分泌VEGF和IL-6水平的影响。 结果:(1)建立了HUASMCs体外培养的组织贴块法。细胞的生长表现为典型的“峰-谷”状特征。传至第3代,经免疫组化检验细胞呈现阳性;(2)随作用时间的延长(3h~48h),替米沙坦对HUASMCs增殖的抑制作用增强(p<0.05),当作用时间为48h时抑制作用最强,抑制率为(29.12±2.89)%。其后随着作用时间的延长(72h~96h)抑制作用与作用时间48h比无显著变化(p>0.05)。替米沙坦浓度在0.5~100μg·mL范围内对HUASMCs增殖的抑制作用呈现浓度依赖性(P<0.05),当浓度为100μg·mL时,抑制作用最强,抑制率为(41.46±3.36)%。其后随浓度增加(200~500μg·mL)抑制作用与浓度为100μg·mL比无显著变化(P>0.05)(3)低、中、高(1、10、100μg·mL-1)3种浓度的替米沙坦对HUASMCs表达VEGF和IL-6的mRNA均有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性(P<0.05);(4)低、中、高(1、10、100μg·mL-1)3种浓度的替米沙坦对HUASMCs分泌VEGF和IL-6均有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性(P<0.05)。 结论:(1)替米沙坦对HUASMCs体外增殖有抑制作用;(2)替米沙坦对HUASMCs表达的VEGF及IL-6的mRNA和因子分泌均有抑制作用。