【摘 要】
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本文旨在研究不同类型牛GPR54基因启动子的变异对GPR54基因表达水平的影响,以揭示牛GPR54基因多态性与牛早熟性之间的关联性。试验提取荷斯坦牛(HT)、皖东牛(WD)及江淮水牛(J
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本文旨在研究不同类型牛GPR54基因启动子的变异对GPR54基因表达水平的影响,以揭示牛GPR54基因多态性与牛早熟性之间的关联性。试验提取荷斯坦牛(HT)、皖东牛(WD)及江淮水牛(JH)3种类型牛血液白细胞总RNA,通过PCR、测序、RT-PCR和双荧光素酶报告基因的方法,检测不同类型牛GPR54基因启动子区973bp区域的多态性,启动子效率以及GPR54基因的表达水平,分析启动子变异在牛品种、年龄和性别间对GPR54基因表达的效应。采用线性模型解析年龄和性别与GPR54基因表达的效应。结果表明:1.根据比较基因组学原理,比较不同类型牛群内的多态性,皖东牛GPR54-973片段存在3个多态性位点,检测出3种基因型CCCCTT、AATTCC和ACTCCT,分别位于-947bp、-816bp和-754bp,荷斯坦牛中仅发现1种基因型,即CCCCTT,而江淮水牛除对应位点的基因型为CCTTCC,其他位点还存在多个SNP位点,构成了WD、HT和JH的不同启动子型。2.根据检测出的启动子型,对3种基因型和3种牛GPR54基因启动子进行双荧光素酶检测,结果显示CCT基因组合启动效率是ATC组合的3倍,是ATC/CCT型的1.39倍(P<0.01);3种牛启动子的启动效率存在着极显著的差异,其中启动子HT效率是JH的4.44倍(P<0.01),是WD的1.99倍(P<0.01);启动子WD效率是JH的2.24倍(P<0.01)。3.比较荷斯坦牛、皖东牛和江淮水牛血液白细胞GPR54基因的表达水平,结果显示,荷斯坦牛和皖东牛GPR54基因的表达水平分别是江淮水牛的4.34和2.25倍(P<0.01),其结果与上述启动子效应相一致。
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