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对脐向造血干细胞(HSC)进行冷冻复苏,建立脐血库以满足脐血干细胞体外扩增和成人移植需要已成为世界各国的研究热点.该文通过考察和分析冷冻复苏前后脐血干细胞各种生物学特性的变化,对影响造血干细胞冷冻复苏效果的多种因素进行分析和评价,为建立优化的脐血造血细胞冷冻复苏方法提供实验数据.实验结果表明:一、降温速率和冻存保护剂的选择对细胞的冷冻复苏效果影响显著.在4℃~-40℃的温度范围内选择-1℃/min的降温速率对细胞的损伤最小;而采用10％DMSO+FBS或者10％DMSO+CPB保护剂则可以最大限度地保护细胞免受损伤.同时在复苏瞬间添加10％albumin的IMDM溶液可有效保护细胞.另外,冻存密度和冻存时间也会对细胞的收率和扩增能力有一定的影响,从实验结果来看,采用1~2×10<7>/mL的密度进行冻存最为适宜.而冻存时间则对CD34<+>细胞影响较大,应尽量避免冻存过程中温度波动所引起的重结晶损伤.综合以上各条件,在合理的冻存方案下,细胞回收率可达95％以上,CD34<+>细胞回收率85％左右,集落回收率85％以上,且细胞仍具有良好的扩增能力,扩增效果可达到新鲜细胞的90％左右.二、采用以上方案冻存CD34<+>富集细胞,回收率可达到70％以上,体外扩增也能达到原来的70％以上,可以满足实验和临床的需要.