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本研究采用生物信息学的方法,寻找出具有可能的生理活性的未知功能基因CRISPLD2与ZBTB34进行研究。
CRISPLD2基因定位于16q24.1,开放阅读框为1491bp,编码496个氨基酸。生物信息学分析表明,CRISPLD2基因编码的蛋白N端是一段信号肽,紧随其后是一个SCP结构域,蛋白的C端是两个LCCL结构域。Northern杂交显示CRISPLD2在所检测的多种组织中都有表达。Western杂交表明CRISPLD2蛋白可以分泌到细胞培养基中;免疫荧光定位观察到CRISPLD2蛋白主要存在于细胞的胞浆中,并且与定位于高尔基体的荧光蛋白共定位;去糖基化酶PNGaseF处理后,CRISPLD2蛋白的分子量降低;BrefeldinA破坏高尔基体后,CRISPLD2蛋白会在细胞里发生积累;这些实验反复证明了CRISPLD2蛋白是一个经过糖基化修饰的、依赖于内质网-高尔基体途径的分泌蛋白。此外,BIAcore分析表明CRISPLD2能够结合脂多糖,提示CRISPLD2蛋白在人体天然免疫机制中可能具有一定的功能。
ZBTB34基因定位于9q33.3,编码框全长1600bp,编码504个氨基酸。生物信息学分析表明,ZBTB34蛋白序列N端包含一个BTB/POZ结构域,C端包含3个C2H2锌指结构。Western杂交与细胞免疫荧光定位显示ZBTB34蛋白定位于细胞核内。荧光报告基因分析提示ZBTB34蛋白是一个剂量依赖型的转录抑制因子,并且这种转录抑制效应可能不依赖于组蛋白去乙酰化酶。