【摘 要】
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恩拉霉素是链霉菌Streptomyces fungicidious NO.B5477产生的一种含17个氨基酸的脂肽类抗生素，根据其末端脂肪酸种类的不同，分为恩拉霉素A和恩拉霉素B两种结构式。恩拉霉素对革
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恩拉霉素是链霉菌Streptomyces fungicidious NO.B5477产生的一种含17个氨基酸的脂肽类抗生素，根据其末端脂肪酸种类的不同，分为恩拉霉素A和恩拉霉素B两种结构式。恩拉霉素对革兰氏阳性菌有较好的抗菌活性，具有优良的促生长及改善饲料利用率的作用，常作为禽、猪、鱼的抗生素促生长剂。
前期本室应用卤代酶基因为分子探针，从分离自红树林土壤环境的167株放线菌中筛选获得一株含有与恩拉霉素合成基因中卤代酶基因高度同源基因的菌株暗黑微绿链霉菌Z40。本文构建了Z40基因组DNA fosmid文库，从该菌株基因文库中定位了4个相互重叠的fosmid，所克隆的片段覆盖完整的恩拉霉素生物合成基因簇。对该菌株发酵产物的HPLC分析及相关生物合成基因的缺失突变分析，确证了菌株Z40是一株新的恩拉霉素产生菌。另外，通过对恩拉霉素生物生物合成基因簇中可能的调节基因进行了初步研究。
核糖体工程是利用微生物的各类抗性突变为筛选标记，高效获得次生代谢产物合成能力提高突变株的推理育种新方法。本文对Z40进行了链霉素抗性突变筛选，得到了一批活性明显增强的突变株，其中菌株5s102和10s13发酵合成恩拉霉素的量比原始菌株Z40提高130％。对5s102和10s13突变株的rpsL基因进行测序分析，发现一个碱基突变位点(T176C)，对应S12蛋白上一个氨基酸变化(K88R)，推测该点突变与突变株的产量提高相关。
对Z40摇瓶发酵的培养基配方及发酵条件进行了优化研究。从M1发酵培养基出发，经过单因素优化及正交优化，获得优化的培养基配方M4(可溶性淀粉3.0g，大豆饼粉2.0g，玉米浆粉1.0g，NaCl3g，CaCO30.5g，蒸馏水100ml，pH7.2)。相比于M1基本发酵培养基，菌株Z40在M4培养基中发酵合成的恩拉霉素比在M1中提高了360％。此外，还对Z40的摇瓶发酵过程进行了研究，为今后发酵罐生产恩拉霉素的工艺优化提供了数据支持。
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