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研究多西紫杉醇联合放疗对人宫颈癌细胞系Hela及其荷瘤裸鼠移植瘤的细胞毒性,初步探讨多西紫杉醇放射增敏作用与Hela细胞凋亡及其相关基因Survivin、Caspase-3表达的关系。
方法MTT法和克隆形成实验分析多西紫杉醇联合放疗对Hela细胞生长的抑制作用,利用多靶单击拟合模型方程评价增敏效果。TUNEL法和流式细胞仪检测多西紫杉醇联合放疗对细胞凋亡和细胞周期的影响,RT-PCR检测Survivin和Caspase-3的表达。建立Hela细胞荷瘤裸鼠移植瘤模型,描记肿瘤生长曲线,通过计算肿瘤抑制率和生长延迟时间评价多西紫杉放射增敏作用,应用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Survivin和Caspase-3的表达。
结果:在离体实验中,多西紫杉醇对Hela细胞的生长抑制有剂量和时间依赖性。0.5μmol/L多西紫杉醇和1.0μmol/L多西紫杉醇联合放疗的放射增敏比(SER)分别为1.26和1.69。0.5μmol/L多西紫杉醇分别预处理0h、3h、6h、12h、24h后联合放疗的SER分别为:1.21、1.31、1.62、1.71。0.5μmol/L多西紫杉醇联合2Gy/次,单次照射;1Gy/次,间隔12h,共2次;0.5Gy/次,间隔8小时,共4次三种分割方式放疗的SER分别为:2.03、2.51、3.57,多西紫杉醇对放疗的增效比分别为:1.41、1.82、2.92。随药物剂量增加、预处理时间延长多西紫杉醇联合放疗组细胞凋亡率逐渐增高,24h达高峰。化放疗组Survivin基因表达量明显低于单放组和对照组,Caspase-3表达与Survivin相反,在化放疗组明显增高。在整体实验中,50mg/kg多西紫杉醇腹腔注射联合放疗组荷瘤鼠生长状态良好,肿瘤绝对生长延缓时间为8d,规格化肿瘤生长延缓时间为13d,较单放组和单化组明显延长,放射增敏比(EF)为1.63、预测值/观察值(E/O)为1.71。化放疗组可见TUNEL阳性细胞较单化组和单放组明显增高。化放疗组Survivin表达显著低于单放组和对照组,caspase-3表达显著高于对照组和单放组(P<0.05)。
结论多西紫杉醇对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,呈剂量和时间依赖性。多西紫杉醇放射增敏作用与促进细胞凋亡有关,多西紫杉醇联合放疗可能通过抑制Survivin表达和促进Caspase-3表达而诱导凋亡。