食管鳞癌中细胞周期相关基因的表达及其临床意义

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目的:研究细胞周期相关基因 CDC2、MCM2、RAD51以及 Ki-67在食管鳞癌中的表达及相关性,探讨其在食管鳞癌发生、发展中的临床意义。  方法:1.筛选基因芯片技术检测4例食管鳞癌及癌旁正常上皮组织所得到的差异表达的基因。2.在筛选的差异表达基因中选取差异显著的并与细胞周期相关的基因CDC2、MCM2以及RAD51,应用实时荧光定量PCR技术在14例食管癌及癌旁正常组织中对目的基因进行mRNA水平的检测,从分子水平验证基因芯片结果的可靠性。3.采用免疫组化技术检测28例癌旁正常食管组织、16例不典型增生食管组织和90例食管鳞癌组织中目的基因的表达,从蛋白水平验证基因芯片结果的可靠性,并与Ki-67的表达进行比较。  结果:1.通过对基因芯片技术检测4例食管鳞癌及癌旁正常组织所得数据进行分析,根据GO(Gene Ontology)功能分类,在这些基因中挑选差异表达较明显的20个有功能的基因,作为与食管鳞癌发生发展以及预后有关的候选基因。2.通过Real-Time PCR技术对目的基因的检测,发现其表达良好,与基因芯片结果一致。3.免疫组化检测目的基因结果显示,在28例正常食管黏膜上皮、16例不典型增生组织及90例食管鳞癌组织中,CDC2表达阳性率分别为35.71%(10/28),56.25%(9/16)和83.33%(75/90),三者之间差异有统计学意义(P<0.05),CDC2在癌组织中的表达与性别、年龄、病理分级、浸润深度、淋巴结转移及临床分期等无关。MCM2在正常食管黏膜上皮中表达阳性率为21.43%(6/28),在不典型增生组织中阳性率为87.50%(14/16),在癌组织中阳性率为92.22%(83/90),三者之间差异有统计学意义(P<0.05),MCM2在癌组织中的表达与病理分级有关(P<0.05)。RAD51在正常食管黏膜上皮中阳性表达率为25.00%(7/28),不典型增生组织中阳性率为93.75%(15/16),在癌组织中阳性率为87.78%(79/90),三者之间差异有统计学意义,RAD51在癌组织的表达与浸润深度有关(P<0.05)。Ki-67在正常食管黏膜上皮阳性表达率为28.57%(8/28),在不典型增生组织中为阳性率为75%(12/16),在癌组织中阳性率为88.89%(89/90),三者之间差异有统计学意义(P<0.05)。对CDC2、MCM2、RAD51及Ki-67进行相关性分析,CDC2与MCM2之间呈显著正相关(r=0.917, P<0.01),MCM2与Ki-67之间呈显著正相关(r=0.936, P<0.01),RAD51与CDC2之间无相关性(r=0.036, P>0.05)。  结论:1.基因芯片技术可用于对食管鳞癌发生、发展相关的差异表达基因的筛选,并经分子和蛋白表达水平的验证,具有可靠性。2. CDC2、MCM2在食管鳞癌中表达均上调,两者呈正相关,两基因在细胞周期调控中起决定性作用,相互协调共同作用促进了肿瘤的发生、发展,可作为临床早期诊断食管癌的重要标记。3. RAD51在食管鳞癌中表达上调,与食管鳞癌的浸润深度有关,可作为判断食管鳞癌临床进展的重要标记。4. Ki-67在食管正常组织至鳞癌组织中表达逐渐增强,与食管鳞癌的发生有关,其与MCM2的表达呈正相关,证明两者在食管鳞癌的发生中起协同作用。
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