黄连解毒汤抗脑缺血再灌注炎性损伤的研究

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目的:研究黄连解毒汤防治急性脑缺血再灌注炎性损伤的作用机制,为其临床应用和科学研究提供参考依据。  方法:1.采用水提取黄连解毒汤,低温冷冻干燥法制备黄连解毒汤提取物。  2.采用高效液相色谱(HPLC)法测定黄连解毒汤提取物中黄芩苷、盐酸小檗碱、栀子苷的含量。  3.线拴法复制大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型,2h后轻提拉线,实现大脑中动脉再灌注,于术后22h、70h评分后断头取脑取血。  ①采用Zea Longa(1989)行为学5级评分法、横木行走实验评价实验动物神经缺失症状。  ②采用HE染色,观察神经元结构变化、数量和分布层次,有无浸润炎性细胞;尼氏体染色,观察海马和皮层神经元的病变特点,尼氏体的病变;从病理上的形态学角度讨脑损伤程度。  ③采用ELISA法,检测血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质的活化标记蛋白(S100B)的含量,评价神经元的损害程度。  ④采用酶联免疫吸附法检测缺血脑组织中白介素-1(IL-1β)、中性粒细胞化学趋化因子(IL-8)的含量和髓过氧化物酶(MPO)的活性变化,综合评价脑缺血损伤炎症发病过程中细胞的黏附、浸润和活化情况。  ⑤采用免疫组化法检测转录因子REL-A(NF-κBp65)了解炎性因子在缺血脑组织的分布与表达特点。  ⑥采用酶联免疫吸附法测定脑缺血后脑组织的5-脂氧酶(5-LOX),白三烯B4(LTB4),白三烯D4(LTD4),半胱氨酰白三烯(CysLTs),了解白三烯类在脑组织中的含量变化规律与脑缺血的关系。  ⑦采用免疫印迹术(Western blotting)检测半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1)和半胱氨酰白三烯受体2(Cy sLT2)在脑组织的表达,了解这些基因在缺血脑组织海马、皮层的分布与表达特点。  结果:采用HPLC法检测黄连解毒汤提取主要有效成份栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量分别为38.6986mg/g、27.07524mg/g、45.0832mg/g。  黄连解毒汤可不同程度改善损伤模型大鼠24h和72h的神经缺损症状,改变行为学评分;减轻大鼠患侧脑可见皮层、海马组织形态学异常,减少皮层损伤、锥体细胞排列不齐,部分神经元丢失;患侧尼氏小体数量显著增加,完整的锥体细胞数量明显增加;与模型组相比降低给药组血清组中NSE、S100B表达水平;降低脑匀浆中IL-1β、IL-8;可明显下调MCAO大鼠海马CA3区的NF-κBp65阳性表达;降低患处脑匀浆中5-LOX、LTB4、LTD4和CysLTs;降低CysLT1和CysLT2在右侧大脑皮层和海马的表达。  结论:黄连解毒汤可以减轻大鼠的急性脑缺血再灌注损伤神经病理损伤,降低NSE、S100B的含量,调节炎症因子和介质,抑制脑组织白细胞和内皮细胞的黏附、浸润和活化;减少患处脑匀浆中5-LOX、LTB4、LTD4和CysLTs含量,抑制CysLTs受体(CysLT1和CysLT2)表达。其防治急性脑缺血再灌注的损伤机制可能是抑制5-LOX-CysLTs-CysLTR通路来减轻炎性损伤。
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