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目的随着诊断和治疗技术的不断发展,胃癌的发病率呈下降趋势,但国内胃癌晚期的发病率仍在增长。本课题通过长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)相关基因芯片进行分析差异表达的lncRNA,筛选出在胃癌组织中相对于癌旁组织中高表达的lncRNA,并在其中选择了表达差异较大的目的lncRNA进行研究。尽管lncRNA在肿瘤发生发展中被广泛研究,但其在胃癌进展的生物学功能作用中尚未清楚。通过分析目的lncRNA在胃癌组织中的表达水平和目的lncRNA在胃癌细胞中的生物学作用,探索目的lncRNA在胃癌组织中的表达意义和胃癌细胞中的功能作用。方法1.收集2016年12月至2017年1月期间的福尔马林固定石蜡包埋的胃癌组织及癌旁组织标本120例,选取符合该课题研究要求的102对胃癌组织标本进行研究。2.通过lncRNA芯片中基因长度、染色体定位、差异倍数等信息分析,初步筛选出在胃癌组织和癌旁组织中差异表的的目的lncRNA。使用荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测目的lncRNA在胃癌组织和癌旁组织的表达差异,并分析其与临床病理因素关系。3.培养人正常胃黏膜上皮细胞株(GES-1)和人胃癌细胞株(AGS,HGC-27,MGC-803和SGC-7901),用qRT-PCR方法检测目的lncRNA在细胞株中的表达水平,并比较目的lncRNA在胃癌组织和胃癌细胞株的表达情况。4.通过脂质体瞬时转染,将化学修饰小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)导入胃癌细胞株(AGS和MGC-803)中,来抑制目的lncRNA的表达水平。在下调目的lncRNA表达水平,分别通过细胞增殖实验、细胞平板克隆实验、细胞划痕实验、Transwell实验和葡萄糖摄取检测胃癌细胞增殖、迁移和糖代谢变化。5.通过慢病毒稳定转染,将过表达目的lncRNA慢病毒转染进入胃癌细胞株(AGS和MGC-803)中,检测目的lncRNA表达水平。再通过细胞增殖实验、细胞平板克隆实验、细胞划痕实验、Transwell实验和葡萄糖摄取检测细胞增殖、迁移和糖代谢变化。结果1.为了研究lncRNAs在胃癌中的作用,课题组通过lncRNA相关芯片初筛高表达的lncRNAs,然后运用GO/Pathway分析进一步阐明lncRNAs潜在的功能和机制。最后,把迪乔治综合征临界区基因 9(DiGeorge syndrome critical region gene 9,DGCR9)作为了课题组的目的lncRNA。2.与癌旁组织相比,DGCR9在胃癌组织中表达水平显著增加。同时,DGCR9在胃癌细胞株(HGC27,AGS,MGC803,and SGC7901)呈现高表达水平相对于正常正常胃黏膜上皮细胞株。3.DGCR9通过ROC曲线下面积对潜在胃癌进行诊断评估。曲线下面积(AUC)为0.691,提示DGCR9对胃癌诊断存在预测价值。4.评估胃癌患者DGCR9表达与临床病理因素之间的关联,以差异倍数2为分割线,将差异倍数小于2的分为低表达组,其余作为高表达组。对临床病理资料统计分析发现DGCR9与胃癌患者的淋巴结转移(P = 0.011)和TNM分期(P = 0.018)显著相关。5.在功能缺失性研究中,Si-DGCR9可以降低胃癌细胞中DGCR9的表达水平。在转染Si-DGCR9 胃癌细胞株中,细胞增殖、迁移和葡萄糖摄取能力相对于转染Si-NC细胞株中显著减少。6.通过构建过表达DGCR9慢病毒(LV-DGCR9),稳定上调了 DGCR9在胃癌细胞中表达水平。同样,相对于对照组LV-NC,高表达的DGCR9显著地促进细胞增殖、迁移和葡萄糖摄取。结论课题组首次发现lncRNA DGCR9在胃癌组织和胃癌细胞中呈高表达水平。异常表达的DGCR9在胃癌中具有一定促癌作用,并与肿瘤淋巴结转移及TNM分期相关。此外,正反调节DGCR9可以影响胃癌细胞增殖、迁移和葡萄糖摄取能力。该研究提示DGCR9可能成为胃癌诊断的一个新的生物标志物。