【摘 要】
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该硕士论文的研究工作集中在如何提高外源基因—龙葵蛋白酶抑制剂Ⅱa(SaPIN2a)在转基因生菜中的表达量.先前已经有研究用含SaPIN2a cDNA植物表达载体pSa7获得转基因生菜.该载
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该硕士论文的研究工作集中在如何提高外源基因—龙葵蛋白酶抑制剂Ⅱa(SaPIN2a)在转基因生菜中的表达量.先前已经有研究用含SaPIN2a cDNA植物表达载体pSa7获得转基因生菜.该载体只含有SaPIN2a cDNA的部分5非翻译区(5UTR)和3非翻译区(3UTR),在35S启动子驱动下的SaPIN2a 在转基因生菜中有大量mRNA积累,但SaPIN2a 蛋白的含量很低.为了研究5UTR和3UTR对转基因表达的影响,用cDNA末端快速扩增的方法(RACE)第一次得到全长SaPIN2a 的5UTR和3UTR序列.进一步将可能决定mRNA稳定性、翻译起始效率、蛋白产物的稳定性的3个顺式因子即SaPIN2a 和3UTR、5UTR序列和KDEL内质网滞留信号添加到含SaPIN2a cDNA的植物表达载体pSa7上:含有KDEL信号序列的命名为pK-121,含有全长5UTR序列的命名为pF-121,含有全长3UTR序列的命名为pT-121,另外还构建了与pSa7相似的pARTSaf.四个载体均获得转基因生菜.虽然PCR、点杂交和Somthern杂交结果显示SaPIN2a已经整合到生菜染色体中,但western杂交检测不到SaPIN2a 的表达产物,只有一株转pARTSaf的是例外.部分植株显示出更强的胰蛋白酶抑制剂的活性.
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