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为了充分发挥IL-12和IL-2的抗肿瘤作用,减少使用剂量和降低毒副作用,该文根据两细胞因子能产生协同作用的原理,从剂量和时间动态两方面着手,系统研究了IL-12联合小剂量IL-2对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖及杀瘤活性的影响,以获得两细胞因子的最佳剂量配伍,为临床治疗提供依据.结果 1.IL-12单独或联合IL-2对PBMC增殖作用的影响 (1)IL-12单独或联合IL-2对静止的PBMC增殖作用的影响5~50/ml IL-12单独不能诱导静止的PBMC增殖,但能与小剂量(10/ml) IL-2协同促进PBMC增殖(与阴性对照组相比,P<0.001),且与IL-12呈剂量依赖趋势.其中10/ml IL-12加/ml IL-2的作用为单用10/ml IL-2的1.6倍;50/ml IL-12加10/ml IL-2可达单用10/ml IL-2的2.2倍.(2)IL-12单独或联合IL-2对激活的PBMC增殖作用的影响.经IL-12单独或联合IL-2作用后,激活的PBMC增殖反应的格局与静止的PBMC相同,但增殖作用较静止的PBMC为强,10~50/ml IL-12加IL-2对激活的PBMC增殖作用约为相同组合细胞因子对静止的PBMC的2倍.动态观察结果发现,受两种细胞因子联合作用后,激活的PBMC的cpm值至第9天尚未下降,而单用10/ml IL-2或100/ml IL-2的增殖高峰分别在第5天和第7天.表明IL-12加IL-2不仅能促进增殖作用的强度,且能延长增殖作用时间.2.IL-12单独或联合IL-2对PBMC杀瘤活性的影响.(1)IL-12单独或联合IL-2对静止的PBMC杀瘤活性的影响.静止的PBMC经5~50/ml IL-12单独作用后,对K562及Raji为最佳浓度,且此浓度IL-12诱导的杀瘤活性明显强于同浓度的IL-2(P<0.05).当该浓度的IL-2与小剂量(10/ml)IL-2合用时,对K562细胞及Raji细胞的杀伤率分别为63.8%±3.3和37.4%±3.6,均明显超过100/ml IL-2的作用(P<0.001).(2)单独或联合IL-2对激活的PBMC杀瘤活性的影响.经IL-12单独或联合IL-2诱导后,激活的PBMC的杀瘤活性强大静止的PBMC.当10/ml IL-12与10/ml IL-2联合作用时,杀瘤活性达到高峰,对K562细胞或Raji细胞的杀伤率分别为72.0%±4.2和68.4%±5.8,均超过IL-12及IL-2单独作用之和,与最适浓度IL-2的作用相当.时间动态结果显示,两种细胞因子联合作用后,激活的PBMC对两种肿瘤细胞株的杀伤活性高峰均在激活后的第二天,其后渐减.表明小剂量的IL-12与IL-2联合能产生明显的协同作用,且激活的PBMC的杀瘤活性比静止的PBMC更强.结论:人PBMC在体外小剂量(10/ml)IL-2预激活后再加入小剂量(10/ml)IL-12共刺激,能使PBMC发挥强而持久的增殖效应和最大的杀瘤活性.该结果为临床肿瘤治疗提供了一种高效低毒的过继免疫疗法,且为细胞因子基因治疗提供新的思路.